Оценка токсикологических свойств продуктов растворения коллагена

Чтобы избежать образование осадка в питательной среде, каждый её компонент предварительно приготовили отдельно в 100 см³ дистиллированной воде. Полученные растворы солей кипятили каждый по 10 - 15 мин, охлаждали, после чего использовали для приготовления среды в течение месяца.

Для приготовления среды культивирования водорослей добавляли 1 см³ каждого концентрированного раствора (кроме солей железа) в колбу на 1 дм³, заполненную до половины дистиллированной водой, доводили до метки 1 дм³ дистиллированной водой, тщательно перемешивали, кипятили раствор 30 мин., охлаждали и после этого добавляли 1 см³ концентрированного раствора соли железа.

Во время выращивания водорослей 2 - 3 раза в день встряхивали питательный раствор с водорослями, чтобы обеспечить удаление образующегося углекислого газа, при накоплении которого среда в исследуемых растворах подщелачивается.

Кормление маточной и синхронизированной культуры дафний.

Кормили маточную и синхронизированную культуру дафний ежедневно, один раз в сутки, добавляли 7 - 10 см³ концентрированной водорослевой суспензии на 1 дм³ культивационной воды, и 1 раз в неделю добавляли дополнительно 3 см³ дрожжевой суспензии на 1 дм³ культивационной воды.

Кормление дафний в эксперименте

Дафний в остром опыте кормили один раз  в течении четырех суток, добавляли 0,1 см³ дрожжевого раствора на 100 см³ культивационной воды.

Получение концентраций растворов. Определяли рН в дистиллированной (рН 7,0 – 7,5) и культивационной водах (рН 7,0 – 8,2), а также и в исследуемой воде (рН 7,0 – 8,2). Затем для изучения токсичности готовили различные концентрации водных вытяжек ПРК.

Таблица 2 – Концентрации водных вытяжек ПРК

2.2.4 Выполнение измерений массовой концентрации растворенного кислорода в пробах вод йодометрическим методом

Перед оценкой токсикологических свойств водной вытяжки из ПРК измеряли массовую концентрацию растворенного кислорода йодометрическим методом,  культивационной и дистиллированной воды, которые являются разбавляющими водами. Для этого готовили следующие растворы:

Раствор хлорида марганца (II)

42 г. MnCl2*4H20 растворили в 50 см³ дистиллированной воды, фильтровали в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доливали дистиллированной водой до метки на колбе.

Щелочной раствор иодида натрия

15 г. KI растворяли в 20 см³ дистиллированной воды, а 50 г. NaOH – в 50 см³ дистиллированной воды, полученные растворы смешивали в мерной колбе вместимостью 100 см³ и доводили объем дистиллированной водой до метки на колбе. При наличии мути раствор фильтровали.

Раствор соляной кислоты 2:1

340 см³ концентрированной соляной кислоты добавляли к 170 см³ дистиллированной воды.

Раствор крахмала, 0,5 %

0,5 г. крахмала взбалтывали с 20 см³ дистиллированной воды. Суспензию постепенно приливали к 80 см³ кипящей дистиллированной воде и кипятили еще 2 - 3 мин. После охлаждения консервировали добавлением 2 - 3 капель хлороформа.

Стандартный раствор тиосульфата натрия с концентрацией 0,020 моль/дм³ эквивалента

При использовании стандарт - титра последний растворяли в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 500 см³, затем отбирали 50 см³ полученного раствора, переносили в мерную колбу вместимостью 500 см³ и доводили объем дистиллированной водой до метки.

При выполнении измерений брали две склянки (колбы БПК) вместимостью 150 см³ взвешивали сухие и пустые с пробкой. Значения записывали до второго знака (м1; м2). Склянки (колба БПК) заполнили пробой воды до краев, чтобы внутри на стенках не имелось пузырьков воздуха. И закрыли склянки (колбы БПК) пробкой, таким образом, чтобы не впустить воздух. Затем их снова взвешивали. Значения записывали до второго знака (м'1; м'2). После этого всё слили.

Заливали в склянку (колбу БПК) пробу воды (культивационной), вводили отдельными пипетками 1 см³ раствора хлорида марганца и 1 см³ щелочного раствора иодида калия (при вместимости склянки 150 см³). Пипетку погружали каждый раз до половины склянки (колбы БПК) и по мере выливания раствора поднимали вверх. Затем быстро закрывали склянку (колбу БПК) стеклянной пробкой таким образом, чтобы в ней не осталось пузырьков воздуха, и содержимое тщательно перемешивали 15 - 20-кратным переворачиванием склянки до равномерного распределения осадка в воде. Склянки с фиксированными пробами помещали в темное место для отстаивания (на 15 мин).

После того, как отстоявшийся осадок занимал менее половины высоты склянки, к пробе приливали 5 см³ (если склянка объемом 150 см³, то добавляют 5 см³; если склянка более 150 см³, то добавляют 10 см³) раствора соляной кислоты, погружали при этом пипетку до осадка и медленно поднимали её вверх по мере опорожнения. Вытеснение из склянки части прозрачной жидкости для анализа значения не имеет.

Закрывали склянку (колбу БПК) стеклянной пробкой, и содержимое тщательно перемешивали до тех пор, пока осадок не раствориться. Получили раствор темно-желтого цвета. Затем сливали полученный раствор в колбы на 250 см³ для титрования, и титруют стандартным раствором тиосульфата натрия до тех пор, пока он не стал светло-желтым. Затем прибавляли 1 см³ свежеприготовленного раствора крахмала и продолжали титрование (раствором тиосульфата натрия) до исчезновения синей окраски. Получили раствор прозрачный.

Результаты измерений массовой концентрации растворенного кислорода йодометрическим методом культивационной и дистиллированной воды (2 колбы вместимостью 150 см³) заносим в таблицу 3 и 4.

Массовую концентрацию растворенного кислорода в анализируемой пробе воды находили по формуле (2):

,                                                 (2)

Массовая концентрация растворенного кислорода в анализируемой пробе воды, должна быть не менее 6 мг/дм³.

Перед началом биотестирования культивационную и дистиллированную воды, которые являются разбавляющими, насыщали кислородом воздуха в течение 2-х суток и затем, определяли содержание растворенного кислорода (таблица 3, 4).

Пример расчета концентрации растворенного кислорода в культивационной воде:

Таблица 3 – Результаты измерений массовой   концентрации   растворенного      кислорода в культивационной воде

Продолжение таблицы 3

Таблица 4 - Результаты измерений массовой концентрации растворенного кислорода в дистиллированной воде