2 Стадия. Получение  свободного госсипола.

      На  холоду растворяют 3 г госсиполацетата в 50 мл эфира, свободного от перекисей, и переносят в коническую колбу, содержащую равный объем 0.4%-ного водного раствора дитионита натрия (неверно называемый гидросульфитом натрия).

      Эфир  отгоняют при температуре бани около 60°C под умеренным вакуумом. По мере испарения эфира на поверхности воды выделяется свободных госсипол в виде корочки. Для полноты гидролиза госсиполацетата эту операцию повторяют еще раз, т.е. отфильтрованный осадок снова растворяют в эфире, добавляют равный объем воды, эфир отгоняют. Полученный таким образом госсипол высушивают на воздухе. Получают 2 гр.

      Для очистки всю порцию госсипола  растворяют в 25 мл эфира и добавляют  петролейный эфир до помутнения раствора. Раствор оставляют на кристаллизацию. Кристаллический госсипол - канареечно-желтый порошок, хранят в пробирке из темного  стекла. Получают чистого госсипола 1-1.2 г, имеющего т. пл. 180-181°C.

      5.4. ТЕБРОФЕН

      3,5,3’,5’-Тетрабром-2,4,2’,4’-тетраоксидифенил.

      

      Белый с серовато-кремовым оттенком кристаллический  порошок. Растворимость:

      Нерастворим - вода, хлороформ, хлористый метилен

      Растворим - кипящей уксусной кислоте (1:36), ацетоне (1:3), этаноле (1:27, при нагревании 1:13), изопропиловом спирте (1:100), водных растворах  щелочей. Растворы в ацетоне, спирте, щелочах неустойчивы, быстро темнеют. ФС-42-1066-76.

      Теброфен - оригинальный противовирусный препарат [6,13]. Теброфен проявляет активность в отношении герпеса простого, герпеса зостер и аденовирусов.

      Метод синтеза разработан во ВНИХФИ и состоит  из трех стадий:

      1 стадия. Синтез пентабромрезорцина (2)

      

2 стадия. Синтез бис-(3,5,5-трибром-4,6-диоксоциклогексен-2-илидена) (трибромрезохинон) (3).

      

Стадия 3. Синтез 3,5,3’5’-Тетрабром-2,4,2’4’-тетраоксидифенил (теброфен) (4).

      

      Бромированием резорцина (1) в водной среде получают пентабромрезорцин (2). Нагревание продукта (2) в бромбензоле при 143-145°C приводит к бис-(3,5,5-трибром-4,6-диоксоциклогексен-2-илидену) (трибромрезохинону) (3) с более высокими и стабильными выходами, чем аналогичная реакция, проведенная без растворителя, или получение (3) путем окисления трибромрезорцина бромом. Восстановлением продукта (3) дитионитом натрия (называемым неверно гидросульфитом натрия) в 45% водном изопропиловом спирте получают 3,5,3’,5’-тетрабром-2,4,2’,4’-тетраоксидифенил (теброфен) (4). Описанные ранее методы восстановления (3) оловом в соляной кислоте и др. дают худшие результаты.

      Стадия 1. Получение пентабромрезорцин (2)

      К охлажденным до 4°C 5.78 л воды приливают в течение 15 мин 2.9 кг брома и затем по каплям, поддерживая температуру не выше 10°C, при перемешивании раствор 385 г резорцина (1) в 770 мл воды. (Обратный порядок прибавления приводит к загрязнению продукта (2) другими продуктами бромирования). Перемешивание продолжают еще 15 мин при 10°С. К полученной суспензии (2) приливают 5 л перегнанного бромбензола (неперегнанный продукт содержит примесь дибромбензола, которая загрязнит (2)) и перемешивают 20 минут. Бромбензольный слой, содержащий продукт (2), отделяют, промывают 2 раза по 1 л воды, чистят 50 г угля и передают на следующую стадию без выделения пентабромрезорцина (2).

Стадия 2. Синтез бис-(3,5,5-трибром-4,6-диоксоциклогексен-2-илидена) (трибромрезохинон) (3).

      Бромбензольный  раствор (2), полученный на предыдущей стадии, нагревают 30 мин при перемешивании  и температуре 143-145°C (реакция сопровождается выделением брома), после чего растворитель полностью отгоняют в вакууме (сначала при остаточном давлении 400 мм, затем при 20-25 мм). К охлажденному остатку приливают 4,5 л хлористого метилена, раствор перемешивают и охлаждают 30 мин при -5°С. Осадок продукта (3) отфильтровывают, промывают 2 раза по 0.5 л и 0.35 л охлажденного до -5°C хлористого метилена, высушивают при 20°C. Получают 550 г продукта (3) с содержанием основного вещества 99.89%; Т.пл. образца составляет 197-200°C. Выход 45.7%, считая на резорцин.

Стадия 3. Синтез 3,5,3’5’-Тетрабром-2,4,2’4’-тетраоксидифенил (теброфен) (4).

      К суспензии 500 г продукта (3) в 3.31 л 44.5% водного изопропилового спирта при 24°C и энергичном перемешивании прибавляют в один прием 473 г гидросульфита натрия (прибавление восстановителя порциями приводит к получению некачественного теброфена); обратный порядок прибавления вызывает образование вместо теброфена (4) другого вещества не установленного строения. Реакция экзотермична и температура повышается до 43-45°C. Дают выдержку при этой температуре с перемешиванием в течение 15 мин (выделяется сернистый газ, масса из оранжево-красной становится сначала темно-зеленой, затем белой) и выливают при перемешивании в 14.5 л воды. Через 5 мин осадок теброфена (4) отфильтровывают, промывают водой (5 раз по 0.5 л) до отсутствия кислой реакции в промывной воде и растворяют в смеси 2.5 л ацетона и 1.5 л воды с добавлением 35 г угля и 8 г гидросульфита натрия. Раствор фильтруют и выливают в 12.5 л, предварительно нагретой до 45°C воды, при этом теброфен (4) выпадает в осадок. Массу перемешивают 10 мин, осадок продукта (4) отфильтровывают, промывают 2 раза по 0.25 л дистиллированной воды, снова растворяют в 2.5 л ацетона. Раствор обрабатывают 20 г угля, фильтруют и выливают в 14 л нагретой до 45°C дистиллированной воды. Суспензию перемешивают 10 мин. Осадок теброфена (4) отфильтровывают, промывают 2 раза по 0.25 л воды и сушат при 80°C. Получают 320 г, выход 82%, считая на продукт (3).

6. анализ противовирусных средств

      6.1. ФТОРУРАЦИЛ

       

      Химическое  наименование.  5-фторурацил; 5-фтор-2,4(1Н,3Н)-пиримидиндион; per. № CAS 51-21-8.

      Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок. Растворимость. Умеренно растворим в воде; мало растворим в этаноле (~750 г/л)  ИР; практически не растворим в хлороформе Р и эфире Р.

      Хранение. Фторурацил следует хранить в плотно закупоренной таре, предохраняющей от действия света.

      Дополнительная  информация. Фторурацил плавится с разложением при температуре около 282 °С. ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: с фторурацилом следует обращаться осторожно, избегая его попадания на кожу и вдыхания.

      Общее требование. Фторурацил содержит не менее 98,5 и не более 101,0% C4H3FN2O2 в пересчете на высушенное вещество.

      Подлинность

      Можно применять либо только испытание  А, либо испытания Б, В и Г.

      А. Проводят испытание, как описано  в разделе «Спектрофотометрия в инфракрасной области спектра» (15, т. 1, с. 45). Инфракрасный спектр соответствует спектру, полученному со стандартным образцом фторурацила СО, или спектру сравнения фторурацила.

      Б. Спектр поглощения раствора испытуемого  вещества в ацетатном буфере рН 4,7 ИР с концентрацией 10 мкг/мл при наблюдении между 220 и 350 нм качественно сходен со спектром раствора стандартного образца фторурацила СО в ацетатном буфере рН 4,7 ИР с концентрацией 10,0 мкг/мл (дает максимум при длине волны около 266 нм и минимум при длине волны около 232 нм). Поглощения растворов при максимуме отличаются друг от друга не более чем на 3%. Поглощение слоя в 1 см при 266 нм около 0,54.

      В. Нагревают 0,5 мл хромовой кислоты ИР в маленькой пробирке на водяной бане в течение 5 мин; раствор смачивает стенки пробирки, но не дает сальности. Добавляют около 3 мг испытуемого вещества и снова нагревают на водяной бане в течение 5 мин; раствор теперь не смачивает стенок пробирки.

      Г. Растворяют 0,05 г в 5 мл воды, добавляют 1 мл раствора брома ИР1; окраска брома исчезает.

      Тяжелые металлы. Используют 1,0 г испытуемого вещества для приготовления испытательного раствора по методике 3, описанной в разделе «Испытание на тяжелые металлы» (15, т. 1, с. 136); содержание тяжелых металлов определяют методом А (15, т. 1, с. 137); не более 20 мкг/г.

      Сульфатная  зола. Не более 1,0 мг/г.

      Потеря  при высушивании. Высушивают при 80 °С и пониженном давлении (не выше 0,6 кПа или около 5 мм рт. ст.) над пентоксидом фосфора Р в течение 4 ч; потеря не более 5,0 мг/г.

      Посторонние примеси. Проводят испытание, как описано в разделе «Тонкослойная хроматография» (15, т. 1, с. 92), используя в качестве сорбента силикагель Р6 (подходит и предварительно покрытая пластинка из коммерческих источников), а в качестве подвижной фазы смесь 70 объемов этилацетата Р, 15 объемов метанола Р и 15 объемов воды. Наносят на пластинку отдельно по 5 мкл каждого из 2 растворов в смеси равных объемов воды и метанола Р, содержащих (А) 20 мг испытуемого вещества в 1 мл и (Б) 0,050 мг фторурацила СО в 1 мл. После извлечения пластинки из хроматографической камеры дают ей высохнуть на воздухе и оценивают хроматограмму в ультрафиолетовом свете (254 нм). Любое пятно, которое дает раствор А, кроме основного пятна, не должно быть более интенсивным, чем пятно, которое дает раствор Б.

      Содержание  фтора. Проводят сжигание, как описано в разделе «Метод сжигания в колбе с кислородом» (15, т. 1, с. 142), используя 7 мг испытуемого вещества и добавляя в качестве поглощающей жидкости около 15 мг пероксида натрия Р и 15 мл раствора гидроксида натрия (0,1 моль/л) ТР. По окончании сжигания оставляют колбу не менее чем на 10 мин, периодически встряхивая, затем разводят до 100 мл водой. С 5 мл раствора проводят испытание на фтор, как описано в разделе «Метод сжигания в колбе с кислородом» (15, т. 1, с. 142); не более 55 мкг F.

      Количественное  определение. Растворяют около 0,4 г испытуемого вещества в 80 мл диметилформамида Р, добавляют 0,25 мл раствора тимолового синего в диметилформамида ИР и титруют раствором гидроксида тетрабутиламмония (0,1 моль/л)

      ТР  до синей окраски по методу Б, описанному в разделе «Неводное титрование» (15, т. 1, с. 149). Каждый миллилитр раствора гидроксида тетрабутиламмония (0,1 моль/л) ТР соответствует 13,01 мг C₄H₃FN₂O2.

 

       6.2. ЦИТАРАБИН

      Молекулярная  формула. C9H13N3O5. Относительная молекулярная масса. 243,2. Структурная формула.

       

      Химическое  наименование. l-β-D-арабинофуранозилцитозин; 4-амино-1-β-D-арабинофуранозил-2(1H)-пиримидон; per. № САS147-94-4.

      Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок без запаха.

      Растворимость. Легко растворим в воде; мало растворим в этаноле (~750 г/л) ИР и хлороформе Р.

      Хранение. Цитарабин следует хранить в хорошо укупоренной таре, предохраняющей от действия света, при температуре не выше 15°С.

      Дополнительная  информация. ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: с цитарабином следует обращаться осторожно, избегая его попадания на кожу и вдыхания.

      Общее требование. Цитарабин содержит не менее 99,0 и не более 100,5%  C9H13N3O5 в пересчете на высушенное вещество.

      Подлинность

      А. Проводят испытание, как описано  в разделе «Спектрофотометрия в инфракрасной области спектра» (15, т. 1, с. 45). Инфракрасный спектр соответствует спектру, полученному со стандартным образцом цитарабина СО, или спектру сравнения цитарабина.

      Б. Спектр поглощения раствора испытуемого  вещества с концентрацией 10 мкг/мл в  соляной кислоте (0,1 моль/л) ТР при  наблюдении между 230 и 350 нм дает максимум при длине волны около 280 нм; поглощение слоя толщиной в 1 см при этой длине .волны составляет около 0,55.