Лекции по "Екологічна токсикорогія"

     Техніка роботи: В колбу ємкістю, 200 мл наливають 50 мл водяної витяжки грунту, додають 10 капель хромово-кислого калію і титрують розчином азотнокислого срібла до появи забарвлення, яке переходить з жовтого у кирпічно-червоний.

     Так як, 50 мл водяної витяжки містить хлориди з 10 г ґрунту, то для визначення хлоридів у 100 г грунту кількість азотнокислого срібла, яке використане на титрування водяної витяжки з і 0 г ґрунту, множать на 10. 

     ВИЗНАЧЕННЯ  МІКРОБІОЛОГІЧНИХ ЗАБРУДНЕНЬ ГРУНТУ

     У процесі екологічного мікробного дослідження розведеної ґрунтової бовтанки визначають мікробне   число,   титр   кишкової   палички,   титр   анаеробів,   загальне   число   термофільних   і термотолерантних мікроорганізмів. Показником фекальних забруднень є Е. Соїі (СІ. Рег/гіп^епа). Гельмінтологічними    дослідженнями    грунту    передбачено    визначення    життєдіяльності гельмінтів, тому що, значна частина їх гине у грунті, в т.ч. яйця глист.

     Для санітарно-гігієнічної оцінки грунти користуються комплексом санітарних показників. _____

     Оцінка саиітарно-скологічіюго стану грунту по ко мнлексу показ никіц_____________

     Важливе значення виявляє вивчення впливу забрудненого Грунту на здоров'я людей. Такі дослідження проводять лікарі медичних центрів і санепідемстанції по територіальній приналежності.    

     ДОСЛІДЖЕННЯ ПЕСТИЦИДІВ У ПРОДУКТАХ  ХАРЧУВАННЯ І ҐРУНТІ.

     Методи  визначення пестицидів включають такі етапи: відбір проб, видалення пестициду з аналізованої проби і при необхідності концентровані, відділення від супутніх домішок, ідентифікація і кількісне визначення.

     Важливим  етапом при виявленні пестицидів є відбір проб. Відібрані проби  повинні об'єктивно відображати  вміст пестицидів у досліджуваному об'єкті. Спосіб відбору проб і їх кількість залежать від цілей дослідження.

     Вибір способу видалення пестицидів з  відібраних проб залежить від багатьох факторів, вчасності, від хімічного  перетворення пестицидів у процесі  екстракції, в тому числі утворення продуктів/які різко відрізняються по фізико-хімічним властивостям від вихідної сполуки: від хімічної взаємодії пестицидів с іншими субстратами проби, яка веде до утворення кон'югатів, які не видаляються звичайними методами екстракції. Процедура екстракцій повинна забезпечити максимальне вилучення певного препарату без його порушення.

     Звичайно  екстракт після концентрування наряду є пестицидами містить велику кількість різних речовин, які мішають  подальшому їх визначенню. Для очистки екстрактів застосовують колоночну, паперову і тонкошарову хроматографію; перероспреділення між неперемішуваними розчинниками; вакуумну сублімацію; гель-фільтрацію і інші способи. Вибір способу очистки залежить від природи домішок.

     Кількісне визначення пестицидів основане на хімічному, фізико-хімічному і фізичних методах, зокрема фотометрії, спектрофотометрії, хроматографії (тонкошаровій, газовій, рідинній і ін.), полярографії і ін. В тих випадках, коли з допомогою вказаних методів не вдається досягти задовільних результатів, можуть.бути використані ферментативні і біологічні методи. 

     ЗНАЧЕННЯ  ТОНКОШАРОВОЇ ХРОМАТОГРАФІЯ  ПЕСТИЦИДІВ

     Одним з найбільш доступних і широко використовуваних при визначенні пестицидів є метод тонкошарової хроматографії. Тонкошарова хроматографія є одним з типів рідинної хроматографії. Основною якісною характеристикою тонкошарової хроматографії є величина Rf-відношення відстані від стартової лінії, хроматаграми до центру плями даної речовини в любий момент часу до відстані, пройденої за це час фронтом розчинника.                                         \

     Відтворення методу тонкошарової хроматографії, в  том числі величини Rf, залежить від багатьох факторів, серед яких найбільше значення мають температура, вологість, розміри частинок сорбенту і його хімічна будова.

     В значному степені чутливість методу тонкошарової хроматографії і його селективність залежать від проявляючих  реагентів.

     При визначенні остаточної кількості пестицидів у різних середовищах методів  тонкошарової хроматографії використовують більше 50 різних реагентів.

     Для кількісного визначення пестицидів на тонкошарових хроматограмах часто  проводять візуальне порівняння розміру плями і інтенсивності  забарвлення зі стандартним рбзчином.

     Можна визначити площу плями, і визначити вміст пестициду по калібрувальному графіку, попередньо, отриманому шляхом хроматографування стандартів на тій же пластинці. Застосування скануючих денситометрів підвищує достовірність результатів.

     Елгюрування пестициду із шару з наступним  фотометричним чи флюорометричним аналізом не набагато зменшує помилку визначення, але приводить до зниження чутливості методу.

     Значний інтерес представляє застосування методу газової хроматографію для  визначення слідової кількості пестицидів. Основною перевагою методу є його висока чутливість. При допомозі даного методу можна визначити 10^-11 – 10^-13  г в пробі, тоді як чутливість колориметричних методів складає 10^-7 – 10^-8 г, тонкошарової хроматографії 10^-6 —' 10^-7 г, люмінесцентного аналізу 10^-7 – 10^-10   г і ін.

     Важливою перевагою методу хроматографії є можливість одночасного кількісного визначення групи сполук. Удосконалення апаратури, методів видалення пестицидів і їх метаболітів з об'єктів дослідження, сумісне використання газової хроматографії з іншими методами дослідження суттєво розширяють можливості визначення пестицидів в різних середовищах і сприяють більш широкому впровадженню цього методу в практику.

     Крім  різних варіантів хроматографії, для  визначення пестицидів використовують спектрофотометричні методи (фотометрія, ультрафіолетова і атомно-адсорбційна спектрометрія), різні способи полярографії, кінетичні методи. Перспективними є імунохімічні методи визначення малої кількості пестицидів.                                                                                   •

     В продуктах живлення і оточуючому середовищі звичайно містяться суміші пестицидів, які належать до різних класів органічних сполук, а також  продукти їх розпаду і метаболіти. Тому все більше значення набувають  методи кількісного визначення і  ідентифікації багатокомпонентних сумішей пестицидів. Використання цих методів перспективно для аналізу об'єктів, які є кінцевими резервуарами пестицидів (вода, ґрунт, атмосферне повітря і ін.), і для моніторингу пестицидів. 

     ВИЗНАЧЕННЯ  ХЛОРОРГАНІЧНИХ ПЕСТИЦИДІВ

     Не  дивлячись на появу нових груп пестицидів, не втратили своє значення хлорорганічні пестициди. До цієї групи  належать галогенпохідні аліфатичних, аліциклічних і ароматичних вуглеводнів (гекзахлорцикло-гексан, поліхлорпірен, гептахлор і ін.). Вони характеризуються високою стійкістю у зовнішньому середовищі, здатністю накопичуватись у жирових тканинах.

     Найбільш  поширеним способами видалень хлорорганічних пестицидів з проби є екстракція органічними розчинниками, перегонка  з водяною парою і адсорбція  твердим сорбентом, Найбільш ефективними способами .очистки екстрактів є омилення, окислення, розпреділення між двома незмішуючимися рідинами, осадження жирів і воску, адсорбційна хроматографія. Для підвищення чутливості визначення хлорорганічних пестицидів кількісному визначенню передує концентрація екстрактів.

     Остаточну кількість хлорорганічних пестицидів успішно визначаються хроматографічними  методами, особливо при наявності  у пробі декількох сполук. Цьому  сприяють високі селективність і чутливість цих методів. 

     Визначення хлорорганічних пестицидів за допомогою газорідинної хроматографії

     А. Підготовка проби до визначення. Наважку 20 г муки заливають 100 мл н-гексану  і екстрагують на приборі для  струшування на протязі 30 хв. Екстракцію повторяють ще 2 рази. Екстракти зливають і фільтрують через шар безводного сульфату натрію у колбу ємкістю 500 мл. Відганяють розчинник до об'єму 2-3 мл.

     Б. Очистка концентратів.

     В колонку діаметром 7 мл вносять 80 г  оксиду алюмінію, активованого до V степеня по Брокману, промивають петролейним ефіром. На промитий шар кількісно переносять при допомозі 2-10 мл петролейного ефіру сконцентрований екстракт. Аналізуємі речовини елюіруготь 15% дихлормстаном у петролейному ефірі чи хлороформом. Об'єм елюату для ДДТ, ДЦЗ, ДДЦ, ТХЦТ -150 мл, гептахлору - 250 мл, адрииу, діелдрину, ендрину - 600 мл. Елюат концентрують у вакуумному ротаційному випаровувачі до 5 мл. Упарений елюат кількісно переносять у 20 мл конічну пробірку" з шліфом і упарюють в ротаційному вакуумному випарювані досуха (температура водяної бані до 50°С, вакуум 610 гПа). Остаток після випарювання в той же час розчиняютьу 1 мл н-гексану (доливають поступово по стінках пробірки).

     В. Для аналітичного визначення використовуються газовий хроматограф з детектором по захопленню електронів; скляна колонка (довжина 1-2 м, діаметр 3 ми). Носій - хроматон М-А\У-ГМХС чи хромосорб V/; рідка фаза 5% 8Е = 30 чи суміш 1,5%ОУ= 17+ 1,95% ОТ = 1.

     Стандарти розчини пестицидів у концентрації 1 мг/мл, з яких послідовним розбавленням у гептані чи гексані готовлять розчини з концентрацією 10-1-0,1-0,01 мкг/мл. Об'єм проби який вводять 2-7 мкл, температура термостату колонок 190°С, детектору 230°С, випаровувача 225°С. Газ-носій - азот особливої чистоти (вміст кисню не більше 0,003%), швидкість току 50-70 мл/хв. Кількісне визначення проводять шляхом заміру висоти площі піків хроматограми і порівнюють ці⁷ величини з відповідними значеннями градуйованого графіку. По якому проводять визначення різних хлоровмісних пестицидів.

     67. ПАТОФІЗІОЛОГІЧНА КЛАСИФІКАЦІЯ ОТРУТ.

       Патофізіологічна  класифікація отрут може проводитися  в залежності від типу гіпоксій (кисневого  голодування). 

     Патофізіологічна  класифікація отрут  (за типом гіпоксії, шо розвивається)