Микробиологическая диагностика

РАЗВИТИЕ: 
  ВОЗМОЖНЫЕ ОСЛОЖНЕНИЯ 
 - Дыхательная недостаточность и смерть в тяжёлых случаях; 
 - Аспирационная пневмония из-за регургитации или ложное проглотывание; 
 - Сухой кератоконъюнктивит; 
 - При долгом залеживании: легочный ателектаз и инфекция; пролежни; увеличение количества осадка в моче;

Ботулизм (Botulismus) — острая кормовая интоксикация различных видов животных, характеризующаяся парезами двигательных мышц и поражением центральной нервной системы. К болезни восприимчив человек.

Этиология

Возбудитель — Cl. botulinum — крупная (0,3— 1,3x3,4—8,6 мкм) спорообразующая палочка, грамположительная в молодых культурах и грамотрицательная в старых, подвижная. Различают шесть типов ссроваров возбудителя: А, В, С, D, Е и F, отличающихся по структуре образуемых токсинов. Все типы образуют в растительных и мясных продуктах в условиях анаэробиоза самый сильный из известных токсинов — нейротоксин.

Вегетативная  форма возбудителя и токсин разрушаются при кипячении через 15-20 мин, но мясо и рыбу нужно проваривать не менее 2 ч.

Эпизоотология

К ботулизму  восприимчивы лошади, крупный и мелкий рогатый скот, норки, птица. Относительно устойчивы к токсину собаки и  дикие животные, серые крысы. У лошадей ботулизм чаще всего вызывает токсин типа В, у крупного рогатого скота — D и С, у мелкого рогатого скота, норок и птиц — С.

Споры возбудителя  широко распространены в окружающей среде, кормах (силос, отруби, овес, ячмень и др.), желудочно-кишечном тракте животных. Токсин накапливается в анаэробных условиях в испорченных кормах, а также трупах грызунов.

Патогенез

Токсин  ботулинуса, попав с кормом в организм животного, проникает в кровь  и избирательно действует на нейроны  спинальных центров и продолговатого мозга. При этом нарушается передача возбуждения от нерва к мышце, что приводит к параличам глотки, дыхательных и сердечных мышц.

Симптомы

В зависимости  от количества поступившего токсина, инкубационный  период при ботулизме колеблется от нескольких часов до 18—20 суток. У животных наблюдают шаткость походки, слюнотечение, выпадение языка, паралич глотки, атонию желудка и кишечника. Температура тела нормальная. У норок отмечают паралич скелетных мышц. Летальность при ботулизме от 70 до 100 %.

Диагноз

Диагноз на ботулизм ставят на основании клинико-эпизоотологических данных и результатов лабораторных исследований остатков корма, содержимого желудка, крови и паренхиматозных органов на предмет обнаружения возбудителя и токсина.

Ботулизм необходимо дифференцировать у лошадей — от бешенства, инфекционного энцефаломиелита, у крупного рогатого скота — от сибирской язвы, болезни Ауески, родильного пареза,ацетонемии, у птиц — ньюкаслской болезни, болезни Марека.

Профилактика и меры борьбы

Предупреждают ботулизм животных путем строгого соблюдения агротехнических и ветеринарно-санитарных правил при заготовке и использовании кормов, исключающих токсинообразование. При закладке силоса, хранении зерна, приготовлении мясного или рыбного фарша не допускают загрязнения их частицами земли, трупами грызунов,, птичьим пометом. Корма животного происхождения можно скармливать только после тщательной проварки в течение 2 часов. Для профилактики ботулизма норок используют специфическую профилактику, ежегодно вакцинируя зверей в возрасте от 45 дней и старше. Иммунитет у привитых зверей сохраняется более года.

Возбудитель: Cl. botulinum (Ерменг, 1896 г.) — спорообразующий анаэроб, подвижная полиморфная с закругленными краями палочка, которая имеет вид теннисной ракетки, Г+. Известно 6 типов возбудителя (А, В, С, D, E, F), каждый тип вырабатывает специфический токсин. Оптимальная температура токсинообразования 25—38°С. В жидких средах токсин разрушается при кипячении через 15—20 минут. 
Эпизоотология. Течение и симптомы. Восприимчивы: лошади, крупный рогатый скот, овцы, козы, птица, из пушных зверей — норки. 
Устойчивы: собаки и хищные звери. Животные заболевают после поедания испорченных кормов, в которых размножаются ботулинические микроорганизмы. 
Инкубационный период: от нескольких часов до 10— 12сут. Отмечают слюнотечение, вялость, паралич глотки, атонию желудка и кишечника. По мере развития болезни наступает паралич языка и нижней челюсти. 
Патолого-анатомические изменения. Желтушность подкожной клетчатки, петехиальные кровоизлияния на сердце и серозных покровах. Из разрезанных сосудов вытекает густая темнокрасная кровь. У крупного рогатого скота в преджелудках находят разнообразные инородные предметы, книжка плотная, высохшая. Слизистая оболочка кишечника катаральногеморрагически воспалена, легкие отечные, головной мозг отечен, нередки периваскулярные кровотечения. 
Диагностика. В лабораторию направляют пробы подозрительных кормов, а также содержимое желудка, печень и кровь от больных животных. 
Дифференциальная диагностика. Следует исключить сибирскую язву, бешенство, болезнь Ауески, листериоз, стахиботриотоксикоз, псевдочуму и болезнь Марека птиц, отравления растениями и солями свинца, послеродовой парез, для чего проводят анализ эпизоотических, клинических и патологоанатомических сведений, результатов лабораторных исследований. 
Профилактика и лечение. Профилактика: при заготовке кормов не допускать их загрязнения. Корма животного происхождения давать животным после проварки. 
Лечение: состоит в промывании желудка и даче слабительных, введение внутривенно физиологического раствора и глюкозы. 
Ветеринарно-санитарная экспертиза. Убой больных животных на мясо запрещен. Туши (трупы) с внутренними органами и шкурой уничтожают. При установлении болезни во время убоя тушу с внутренними органами и шкурой уничтожают.

Clostridium tetani — строгий анаэроб, отличается высокой чувствительностью к 0₂ На МПА и терминальными спорами желатине возбудитель столбняка растёт медленно и образует тонкие прозрачные колонии двух типов: гладкие, прозрачные S-колонии столбняка и серовато-жёлтые, шероховатые R-колонии столбняка.

S-колонии столбняка образуют отростки, придающие им паукообразную форму.

Позднее отростки сливаются, образуя «сеточку»  на поверхности среды. При посеве столбиком в полужидкий агар через 24-48 ч S-колонии столбняка имеют вид пушинок с плотным коричневым центром; R-колонии столбняка имеют вид чечевичек.

Антигенная  структура столбняка

У С. tetani выявляют О- и Н-Аг. По жгутиковым Аг (Н-Аг) выделяют 10 сероваров. Все серовары столбняка продуцируют идентичные по своим антигенным свойствамтетаноспазмин и тетанолизин.

Биохимические свойства столбняка

Большинство штаммов инертно к углеводам. С. tetani проявляет слабые протеолитические свойства и медленно расщепляет белки и пептоны до аминокислот. Последние разлагаются до угольной кислоты, водорода, аммиака, летучих кислот и индола.

Бактерии столбняка образуют желатиназу и рениноподобный фермент, опосредующий появление затемнённых зон вокруг колоний С. tetani на молочном агаре.

Ботулизм — острое инфекционное заболевание, характеризующееся интоксикацией организма с преимущественным поражением центральной нервной системы. Болезнь возникает в результате употребления пищевых продуктов, содержащих токсины Clostridium botulinum.

Таксономия. Возбудитель ботулизма относится к отделу Firmicutes, роду  Clostridium.

Морфологические и тинкториальные свойства. C.botulinum — грамположительные палочки с закругленными концами, образуют споры и имеют вид веретена. Капсулой не обладают, перитрихи.

Культуральные свойства. Строгий анаэроб. Оптимальными для его роста являются температура 30С. На кровяном агаре образует небольшие прозрачные колонии. В столбике сахарного агара можно обнаружить R-формы зерен чечевицы и S-формы – пушинок.

Биохимическая активность. Выделяют 4 группы: бактерии I группы – выраженные протеолитические свойства, гидролизуют желатину, ферментируют глк. и мальтозу; II группы – проявляют сахаролитическую активность, протеолитической – нет. III группа – проявляют липазную активность, гидролизуют желатину. VI – гидролизуют желатину, не проявляют сахаролитических свойств.

Все типы образуют желатиназу, лецитиназу, H₂S.Бактерии типа А,В,Е,F – ферментируют глк., фруктозу, мальтозу, сахарозу. Типа С,D – глк, мальтозу.

Антигенные  свойства. Имеются группоспецифические жгутиковые – Н и типоспецифические О-АГ бактерий, не проявляющие токсических свойств. По структуре экзотоксинов бактерии разделяют на 8 сероваров: А, В, С1,С2, D, E, F и G.

Факторы патогенности. Выделяет экзотоксин, самый сильный из всех биологических ядов. Ботулинический экзотоксин обладает нейротоксическим действием. Его особенностью является высокая устойчивость к нагреванию (сохраняется в течение 10—15 мин при 100 °С), к кислой среде, высоким концентрациям поваренной соли, замораживанию, пищеварительным ферментам.

Резистентность. Споры обладают очень большой резистентностью к высокой температуре (выдерживают кипячение в течение 3—5 ч).

Эпидемиология. Широко распространен в природе. Его обнаруживают в организме животных, рыб, откуда он попадает в почву и воду. В почве C.botulinum долгое время сохраняется в виде спор и даже может размножаться, что позволяет отнести ботулизм к сапронозным инфекциям. Из почвы возбудитель попадает в пищевые продукты и при наличии анаэробных условий размножается там и выделяет экзотоксин. Путь заражения ботулизмом — пищевой. Чаще всего фактором передачи этой инфекции являются консервы (как правило, домашнего приготовления) — грибные, овощные, мясные, рыбные.

Патогенез. Ботулинический токсин попадает с пищей в ЖКТ. Устойчивый к действию пищеварительных ферментов и хлористоводородной кислоты, токсин всасывается через стенку кишечника в кровь и обусловливает длительную токсинемию. Токсин связывается нервными клетками и блокирует передачу импульсов через нервно-мышечные синапсы. В результате развивается паралич мышц гортани, глотки, дыхательных мышц, что приводит к нарушению глотания и дыхания; наблюдаются изменения со стороны органа зрения.

Клиника. Инкубационный период продолжается от 6—24 ч до 2—6 дней и более. Чем короче инкубационный период, тем тяжелее протекает болезнь. Обычно болезнь начинается остро, но температура тела остается нормальной. Возможны различные варианты ботулизма — с преобладанием симптомов поражения ЖКТ, зрения, глотания, речи или дыхательной функции. В первом случае болезнь начинается с появления сухости во рту, тошноты, рвоты, поноса, во втором — начальные проявления болезни связаны с нарушениями со стороны зрения (снижение остроты зрения, двоение). В результате паралича мышц гортани появляется осиплость, а затем голос пропадает.

Иммунитет. После перенесенной болезни иммунитет не формируется. Однако введение ботулинических анатоксинов создает прочный искусственный вариантоспецифический антитоксический иммунитет.

Микробиологическая диагностика. Исследуют промывные воды желудка, рвотные массы, остатки пищи, кровь. Применяют бактериологический метод, биологический (реакцию нейтрализации токсина антитоксином), с помощью реакции обратной непрямой гемагглютинации, и серологический (РПГА) методы, позволяющие выявить в исследуемом материале ботулинический токсин.

Лечение. Антитоксические противоботулинические гетерологичные сыворотки и гомологичные иммуноглобулины.

Профилактика. Соблюдение правил приготовления продуктов, домашних консервов. Для специфической активной профилактики ботулизма разработаны и применяются по показаниям тетра- и трианатоксины, в состав которых входят ботулинические анатоксины типов А, В и Е. Для экстренной пассивной профилактики используют противоботулинические антитоксические сыворотки.

Ботулизм (от botulus — колбаса) — пищевое отравление, протекающее в виде токсикоинфекции и сопровождающееся поражением ядер продолговатого мозга. 
Таксономия. Возбудитель ботулизма Clostridium botulinum относится к семейству ВасШасеае, роду Clostridium. Открыт в 1896 г. Э. Ван-Эрменгемом. 
Морфология и тинкториальные свойства. Возбудитель ботулизма — крупная палочка длиной 4—9 мкм шириной 0,6—0,9 мкм, с закругленными концами. Споры расположены субтерминально (в виде теннисной ракетки), имеют перитрихиальные жгутики, грамположительны. 
Культивирование и ферментативные свойства. Возбудители ботулизма — строгие анаэробы. Оптимальная температура для роста и токсинообразования от 28 до 35 °С. На среде Китта-Тароцци образуют помутнение и газообразование; культура может издавать запах прогорклого масла. При посевах в высокий столбик агара вырастают колонии, имеющие форму чечевиц или комочков ваты. На кровяном агаре — прозрачные колонии, окруженные зоной гемолиза. Микробы вырабатывают сахаролитические ферменты, разлагающие глюкозу, мальтозу, глицерин до кислоты и газа; выделяют протео-литические ферменты —разжижают желатин, свернутую сыворотку, обладают лецитиназной активностью. 
Антигенная структура и токсинообразование. Возбудители ботулизма имеют Н- и О-антиген, являющийся общим для всех семи серологических вариантов возбудителя: А, В, С, D, E, F, G. Каждый серовар обладает специфической иммуногенностью, оказывая одинаковое 
патогенетическое действие на организм человека и животных. Наиболее сильными для человека являются токсины сероваров А, В, Е. Они выделяются кло-стридиями ботулизма при размножении в пищевых продуктах, в организме человека и животных, на питательных средах. Ботулинический экзотоксин получен в сухом и кристаллическом виде; в 1 мг его содержится до 100 млн. смертельных доз для белой мыши. Это самый сильный из всех известных биологических ядов. 
Ботулинический экзотоксин устойчив к действию желудочного сока, солнечного света, высушиванию, замораживанию, выдерживает кипячение до 10 мин, в консервах сохраняется 6—8 мес. Разрушается токсин при кипячении через 10 мин или при нагревании до 90°С в течение 40 мин. 
Резистентность. Споры клостридий ботулизма длительно сохраняются в почве, воде, на фруктах и овощах; прорастают в пищевых продуктах, консервах, где есть анаэробные условия, устойчивы к воздействию высоких концентраций хлорида натрия, замораживанию, действию солнечного света. При кипячении погибают через 6 ч, при 120°С — через 20 мин, при действии 40% формалина — через сутки. 
Патогенность для животных. К экзотоксину наиболее чувствительны лошади, рогатый скот, птицы, морские свинки, кролики, белые мыши. Смерть у экспериментальных животных наступает через 1—3 дня после введения им токсина. 
Патогенез и клиника. Ботулизм — пищевая токсико-инфекция, возникающая у человека при употреблении продуктов, содержащих токсин или возбудителей. В развитии заболевания основную роль играет ботулинический экзотоксин, который быстро всасывается в кровь и поражает в первую очередь ядра продолговатого мозга, сердечно-сосудистую систему. Инкубационный период обычно длится от 6 до 24 ч, но может быть до 8 дней, что зависит от количества токсина и клостридий ботулизма, попавших в организм. Заболевание начинается обычно внезапно: появляются боли в области желудка, тошнота, головная боль. В дальнейшем в результате поражения ядер продолговатого мозга наступает паралич глазных мышц, нарушение аккомодации, птоз век, двоение предметов, расстройство речи и глотания. Смерть наступает от паралича дыхания или остановки сердца. 
Иммунитет. Перенесенное заболевание не оставляет иммунитета. Для человека характерна высокая чувствительность к экзотоксину ботулизма. 
Лабораторная диагностика. Для исследований берут рвотные массы, промывные воды желудка, кровь, испражнения, мочу, а также пищевые продукты. Исследование проводится одновременно с целью обнаружения ботулинического экзотоксина и возбудителя ботулизма. Выделение ведется по общей методике выделения анаэробных культур. Для обнаружения токсина экстракт, приготовленный из исследуемого материала, вводят внутрибрюшинно или подкожно белым мышам или морским свинкам. Для определения серовара токсина трем животным вводят фильтрат с антитоксической сывороткой А, фильтрат с антитоксической сывороткой В и фильтрат с антитоксической сывороткой Е. Наблюдение за животными ведут в течение 4 дней. При наличии в исследуемом материале токсина выживает только та мышь, которой введен токсин, нейтрализованный антитоксической сывороткой соответствующего серовара. 
Эпидемиология. Возбудители ботулизма широко распространены в природе; больше всего их находится в почве и воде, где они длительное время сохраняются в виде спор. Споры обнаруживаются также в кишечнике человека, животных и рыб. Человек заболевает в результате употребления консервированных продуктов, содержащих экзотоксин или возбудителя. В последнее время наиболее частой причиной заболевания являются продукты домашнего консервирования (маринованные или соленые грибы, овощные консервы, рыба и др.). По внешнему виду и органолептическим свойствам продукты, инфицированные возбудителем ботулизма и содержащие токсин, не отличаются от доброкачественных. 
Специфическое лечение. Главным в специфическом лечении ботулизма является своевременное введение противоботулинических антитоксических сывороток с целью нейтрализации ботулинического экзотоксина. Вначале вводится антитоксическая сыворотка четырех сероваров (А, В, С, Е) в равных дозах, после установления серовара—сыворотка соответствующего серовара. Одновременно больным вводится полианатоксин (А, В, С и Е) для стимуляции выработки антител.