Фитохимический анализ ЛРС, содержащие эфирные масла

Качество сырья регламентируется ГФ СССР ХI издания(ст. 15). Раздел «Количественное определение» предусмотрен анализ сырья на содержание эфирного масла: Аналитическую    пробу    сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями  диаметром 1 мм.

Содержание эфирного масла  определяют  в  10  г  измельченного  сырья методом 1 или 2 (ГФ XI,  вып.  1, с. 290). Время перегонки 4 ч. Числовые показатели.  Эфирного масла не менее 2%; влажность не более 12%.

7. Почки тополя -  Gemmae Populi nigrae.

Качество сырья регламентируется ОСТом 8237 и ФСП « Тополя почки», разработанной в Самаровском государственном медицинском университете. Раздел « Качественные реакции» предусматривает определение подлинности сырья методом спектрофотометрии ( максимум поглощения при длине волны 289 нм + 2 нм в области 320 нм до 330 нм) и методом ТСХ: на хроматограмме должно быть пятно желто – оранжевого цвета с R_f  около 0,8(пиностробин) и оранжевое пятно с величиной R_s около 0.7(пиноцембрин).

Раздел «Количественное  определение» включает в себя два  метода – спектрофотометрический (аналитическая длина волны 289 нм) и ВЭЖХ (для анализа сырья, предназначенного для получения ГСО пиностробина).

Числовые показатели: суммы  флавоноидов в пересчете на пиностробин  должны составлять не менее 15% (спектрофотометрический метод), пиностробина должно быть не менее 3% (метод ВЭЖХ), влажность – не более 8% и др.

8. Корневища с корнями Валерианы – Rhizomata cum radicibus Valerianae.

Качество сырья регламентируется ГФ СССР XI издания: ФС 77)корневища и корни), а также ФС 42-1530-89 (корневища и корни свежие).

Числовые показатели.   Цельное  сырье.  Эстрактивных  веществ, извлекаемых 70%  спиртом,  не менее 25%;  влажность не более  15% и др.

Измельченное сырье.  Экстрактивных  веществ,  извлекаемых  70% спиртом, не менее 25%; влажность не более 15% и  др.

Порошок. Экстрактивных веществ,  извлекаемых 70%  спиртом,  не менее 25%;  влажность не более 10% и др.

Качество сырья определяется содержанием изовалериановой кислоты, которой должно быть не менее 1%. При меньшем содержании в сырье изовалериановой кислоты не может быть получена настойка с содержанием кислоты не менее 0.2%.

9. Пихтовый бальзам – Balsamium Abietis. Пихтовое масло – Oleum Abietis.

Качество пихтового масла  регламентируется В Ф С. Оценка качества масла осуществляется по борнилацетату (метод ГЖХ).

10. Почки сосны – Gemmae Pini. Хвоя (побеги, листья) – Folia Pini (cormus Pini). Эфирное масло – Oleum Pini. Терепентин (смола, живица сосновая) – Terebinthina. Скипидар очищенный – Oleum terebinthinae rectificatum.

Качество сырья должно соответсвовать требованиям ГФ СССР XI издания (ст. 42). Раздел « Количественное определение» предусматривает определение содержания эфирного масла в  20  г  крупноизмельченного  (без просеивания) сырья методом 1 (ГФ XI, вып. 1, с. 290). Время перегонки 1,5 ч. Числовые показатели.  Эфирного масла не менее 0,3%;  влажность не более 13% и др.

11. Плоды можжевельника – Fructus Juniperi.

Качество сырья регламентируется ГФ СССР XI издания (ФС 34). Содержание эфирного масла («Количественное определение») определяют определяют  в  15  г  сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1мм методом 1 (ГФ XI, вып. 1, с. 290). Время перегонки 2 ч. Числовые показатели: эфироного масла должно быть не менее 0.5%, влажность – не более 20 % и др.

12. Цветки Пижмы – Flores Tanaceti.

Качество сырья регламентируется ГФ СССР XI (cт. 11). Количественное определение суммы флавоноидов и фенилкарбоновых кислот осуществляют методом спектрофотометрии (аналитическая длина волны 310 нм) с использованием ГСО лютеолина. Числовые показатели: в цельном сырье суммы флавоноидов и фенилкарбоновых кислот в пересчете на лютеолин содержится не менее 2,5 %, влажность не превышает 13% и др.

13. Цветки Ромашки аптечной – Flores Chamomillae.

Раздел «Количественное  определение» предусматривает определение  содержания эфирного масла в 15 г измельченного сырья методом 1 или 2 (ГФ XI,  вып. 1, ст.290).  Числовые показатели: эфирного масла должно быть не менее 0,3%, влажность – не более 14% и др.

Качество сырья «Цветки  ромашки обмолоченные» регламентирует ВФС 42-974-80. По внешним признакам это  смесь трубчатых и краевых  цветков, ложа соцветий, реже цельных корзинок, а также кусочков стеблей и листьев.

Числовые показатели: содержание эфирного масла должно быть не менее 0,2%, влажность – не более 14% и др.

14. Трава тысячелистника – Herba millefolii.

Качество сырья регламентируется ГФ СССР XI издания (ст.53). раздел « Количественное определение» предусматривает  анализ сырья на содержание эфирного масла в аналитической пробе сырья (около 20 г), измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, методом 3 (ГФ XI, вып.1, стр. 290, время перегонки 2 ч). Числовые показатели: эфирного масла должно быть не менее 0,1%, влажность не должна превышать 13% идр.

15. Березовые почки – Gemmae Betulae.

Качество почек березы регламентируется ФС 41 (ГФ СССР XI издания). Содержание эфирного масла определяют в 20 г измельченного сырья методом 1 (ГФ XI, вып.1, стр.290). Числовые показатели: эфирного масла должно быть не менее 0,2%, влажность не должна превышать 10% и др.

Листья березы (ВФС 42-2487-95) из-за невысокого содержания эфирного масла анализируют по содержанию суммы флавоноидов (нижний предел 2,5% ). Количественное определение осуществляют методом дифференциальной спектрофотометрии с использованием ГСО рутина.

16. Шишки хмеля – Strobili Lupuli. Масло Хмеля – Oleum Lupuli.

 Качество сырья регламентируется  ГОСТом 21946-76. Числовые показатели: содержание  а-кислот должно быть не менее  2,5%, влажность – не менее 11% и не более 13% и др.

17. Корневища Аира – Rhizomata Calami.

Качество сырья регламентируется ГФ СССР XI издания. Содержание эфирного масла определяют в 10 г измельченного сырья методом 3 (ГФ XI, вып.1, стр. 290).

Числовые показатели для  цельного сырья : эфирного масла должно быть не менее 2%; влажность не должна превышать 14% и др.

18. Трава и листья полыни горькой – Herba et folia Artemisiae absinthii.

Качество сырья регламентируется ГФ XI издания(ст.44). числовые показатели травы: экстрактивных веществ, извлекаемых 70% спиртом, должно быть не менее 20%, влажность не должна превышать 13%, золы общей – не более 13% и др.

Числовые показатели листьев: экстрактивных веществ, извлекаемых 70% спиртом, должно быть не менее 25%, влажность  не должна превышать 13% и др.

Стандартизация за рубежом  осуществляется, как правило, по содержанию эфирного масла (не менее 0,2%) и по показателю горечи – в интервале 1:1000-2500.

19. Цветки полыни цитварной – Flores Cinae.

Качество регламентируется ФС 42-2785-92. Числовые показатели: сантонина  должно быть не менее 2,5%, влажность  – не более 13% и др.

20. Корневища и корни Девясила – Rhizomata et radices Inulae.

Качество регламентируется ГФ СССР XI издания: ФС 73. При нанесении йода не должно наблюдаться синего окрашивания (крахмал). При нанесении на поперечный срез 2-3 капель 20% спиртового раствора а-нафтола или тимола и 1 капли конц. серной кислоты должно наблюдаться красно-фиолетовое или оранжево-красное окрашивание соответственно (инулин). Раздел «Количественное определение» в НД отсутствует.

21. Побеги багульника болотного – Cormi Ledi palustris.

    Качество сырья  регламентируется ФС 1 ( ГФ СССР  XI издания).

Числовые показатели.  Цельное сырье.  Эфирного масла  не  менее  0,1%;  влажность  не  более  14% и др.

Примечание. Содержание эфирного масла в сырье, предназначенном  для получения ледина,  должно быть не менее 0,7% и ледола в нем не  менее 17%.  Определение содержания ледола в эфирном масле проводит  завод - изготовитель препарата ледина.

Измельченное сырье. Эфирного масла не менее 0,1%; влажность не    более 14%;  золы общей не более  4%;  золы,  нерастворимой  в  10% растворе   хлористоводородной   кислоты,  не  более  1%;  кусочков  серовато - коричневых стеблей не более 10%;  частиц, не проходящих  сквозь  сито  с отверстиями диаметром 5 мм,  не более 5%;  частиц,  проходящих сквозь сито с отверстиями размером  0,5  мм,  не  более  10%;  органической  примеси  не  более 1%;  минеральной примеси не более 0,5%.

Количественное определение.  Определение  содержания  эфирного   масла.  Аналитическую пробу сырья  измельчают до размера частиц 1-3  см.   Для   определения  содержания  эфирного  масла  берут  30  г   измельченного сырья,  помещают в  колбу  вместимостью  1000  мл  и   прибавляют  400  мл  воды.  Определение  содержания эфирного масла   проводят методом 2 (ГФ XI, вып. 1, с. 290). Время перегонки - 4 ч,   после   чего  охлаждение  холодильника  прекращают  с  тем,  чтобы   закристаллизовавшаяся часть эфирного масла на стенках холодильника  расплавилась и опустилась в приемник.

Определение содержания ледола в эфирном масле.  Эфирное  масло    нагревают  на  водяной бане при температуре 60 град.  С до полного расплавления кристаллов ледола  и  осторожно  перемешивают  тонкой    стеклянной  палочкой или стеклянным капилляром с запаянным концом.   Пробу эфирного масла отбирают (не допуская попадания водной  фазы)   пипеткой,  подогретой  до  той  же  температуры  на  той же бане в отдельной пробирке.

  Затем немедленно  во  взвешенную  (с  погрешностью  +/-0,01 г)  колбу вместимостью 50 мл  с  притертой  или  плотно  закрывающейся полиэтиленовой  пробкой  помещают  около  0,2  г  (точная навеска)  эфирного масла и около 0,06 г (точная  навеска)  метилового  эфира миристиновой  кислоты,  пипеткой  прибавляют  20  мл 95%  спирта и  перемешивают  до  полного   растворения   компонентов;   1-2   мкл полученного  раствора  с  помощью  микрошприца вводят в испаритель газового хроматографа и включают программирование температуры.

После окончания   температурной   программы  отключают  нагрев  термостата,  открывают дверку термостата и  охлаждают  колонку  до температуры  90-95  град.  С,  наблюдая за падением температуры по термометру.  Установив на шкале датчика температур  первоначальную   изотермическую  температуру  колонки 100 град.  С,  вновь включают   нагрев термостата и по достижении заданной температуры 100 град. С  весь  цикл  повторяют снова.  Таким образом получают не менее трех хроматограмм.   Параллельно   при   точно   таких   же    условиях хроматографируют  не менее трех раз 1-2 мкл эталонной смеси ледина  и метилового эфира миристиновой  кислоты,  чередуя  ввод  эфирного  масла с вводом эталонной смеси .

На полученных  хроматограммах  измеряют  линейкой высоту пиков   ледола и метилмиристата (с погрешностью  +/-  0,5  мм),  при  этом  высота  пиков  должна быть не менее 100 мм,  а критерий разделения хроматографической колонки (К) для пиков ледола и  палюстрола -  не  менее 1.              

                             ДЕЛЬТА V _R

                  К = -----------------------------,

                       ми(0,5 х h)л + ми(0,5 х h)п

              где ДЕЛЬТА  V_R  - разность удерживаемых объемов ледола и палюстролав миллиметрах;  ми(0,5 х h) - ширина пиков ледола (л) и палюстрола (п) на половине его высоты в миллиметрах.

  Содержание ледола в процентах (Хл) в  навеске  эфирного  масла  рассчитывают  как  среднее из трех хроматографических повторностей по формуле:

                                Pвн.ст. х hл х 100

                        Хл = ------------------,

                              hвн.ст. х F х Pм

 

где Рвн.ст.  -  навеска  метилового  эфира  миристиновой кислоты в граммах (в определяемой пробе);  h - высота пиков  в  миллиметрах:  ледола (л),  внутреннего  стандарта  (вн.ст.)  -  метилового эфира миристиновой кислоты;  Pм - навеска эфирного масла в граммах;  F -  коэффициент пересчета.

  Коэффициент пересчета рассчитывают по хроматограммам эталонной смеси как  среднее  из  трех  хроматографических  повторностей  по формуле:

                                  Рвн.ст. х hл

                          F = ---------------,

                               Рл х hвн.ст.

 где Рвн. ст. - навеска  внутреннего стандарта (в эталонной  смеси) в граммах; Рл  -  навеска   ледина  (в  эталонной  смеси)  в граммах;  hвн.ст.  - высота  пика  внутреннего  стандарта   на  хроматограмме  эталонной   смеси  в  миллиметрах;  hл  -  высота  пиков  ледола на  хроматограмме эталонной смеси  в миллиметрах.

          Примечание. 1.  Условия  хроматографирования:   газожидкостный хроматограф "Хром-4" (ЧССР) с пламенно - ионизационным  детектором;  колонка стеклянная 1200 мм с внутренним диаметром  3  мм  заполнена хромасорбом  WAW  60-80  меш  с нанесенным  на него 0,6%  раствором  полиэтиленгликольадината.  Температура колонки, программируемая  от 100  до 150 град.  С со скоростью  5 град.  С в 1 мин;  температура   испарения 180 град.  С; газ - носитель - азот. Расход газов: азота - 60 мл/мин,  водорода - 40 мл/мин, воздуха  - 400 мл/мин; скорость  протяжки  диаграммной  ленты  самописца  -  10  мм/мин.   Возможно  использование   других  типов  хроматографов,  имеющих  аналогичные  параметры   колонки,  носителей  и   жидких   фаз,   обеспечивающих  необходимый  критерий разделения ледола и  палюстрола.