Пчеловодство

Водный экстракт прополиса имеет слабокислую  реакцию, спиртовой – слабощелочную.

В зависимости  от района сбора прополис бывает различного цвета. В странах Европы он чаще тёмно-зелёный, коричневый или бурый. Со временем может  приобретать более тёмную и даже чёрную окраску, становиться более плотным, терять ароматный запах. При правильном хранении прополис не утрачивает лечебных свойств, но наиболее выраженным терапевтическим эффектом обладает всё же свежесобранный продукт.

Применение  прополиса при лечении различных заболеваний требует глубоких знаний свойств этого вещества. Поэтому исследователи большое внимание уделяют изучению его химического состава. С помощью воздействия на прополис экстрагенов – дистиллированной воды, бензина, эфира, этилового спирта различной концентрации, бензола, раствора уксусной кислоты – было установлено, что он содержит смолы, эфирные и другие летучие соединения, воски, углеводороды, дубильные вещества и механические примеси. Содержание в нём этих компонентов колеблется в широких пределах.

Таблица 1

Процентное  содержание составляющих компонентов  прополиса

* от массы механических примесей [2, с.7].

Количество  воска и механических примесей зависит  в основном от качества сбора прополиса. В прополисе обнаружены такие  фенолы, как коричная кислота и  её производные, секреты слюнных  желез пчёл.

В одной из составных частей прополиса – пчелином воске – найдено:

Таблица 2

Процентное  содержание составляющих компонентов  прополисного воска [2]

После омыления сложных эфиров выделены и идентифицированы церидовый и мерициловый спирты. Пыльца прополиса богата провитамином А (каротином), В1 (аневрином), В₂ (рибофлавином), Е (токоферолом), С (аскорбиновой кислотой), Н (биотином), РР (никотиновой кислотой), Р (фактором устойчивости капилляров) и др., а также включает 40% белковых веществ [3, с.18]. В состав прополиса входит большое количество химических элементов особенно много кобальта, кальция, алюминия, магния, кремния. Он содержит также медь, цинк, марганец.

Удалось установить, что ряд сложных соединений  присутствует в составе прополиса практически постоянно, независимо от района обитания и породы пчёл. Эти вещества и определяют характер действия прополиса на организм. Они включают три типа соединений флавоноидной природы: тризамещённые флавоноиды, тетразамещенные флавоноидыи производные флаванона (акацетин, 7,4-диметоксифлавон, 3,5-диокси-7,4-диметоксифлавон). Содержание каждого из них в прополисе не превышает 2% [2, с.8].

Также в составе  прополиса были обнаружены кумарины, кофейная, феруловая, фенолкарбоновые и жирные кислоты, а также полисахариды, галангин, хризин, тестохризин, изольфинин и пиноцембрин.

Таким образом, в прополисе выявлено в настоящее  время около 20 природных биологически активных соединений, в основном – полифенолов. Но это далеко не исчерпывающие данные о прополисе. Применение современных методов анализа, унифицированных для сырья растительного и животного происхождения (газо-жидкостная, тонкослойная, бумажная хроматография, масс-спектроскопии), позволило установить, что в нём содержится ещё целый комплекс неидентифицированных компонентов. Идентификация этих веществ является приоритетной для дальнейшего усовершенствования методики стандартизации данного сырья, определения его доброкачественности, разработать технологию приготовления новых лекарственных форм.

5. Фармакологические свойства: антимикробная активность

Пчеловодам  известно, что внутри улья никогда  не возникает неприятного гнилостного  запаха даже в том случае, если к  пчёлам по каким-либо причинам попадают другие виды живых организмов – насекомые, мыши, слизняки, ужи и т.д. Пчёлы замуровывают трупы прополисом, и такие «мумии» не подвержены различным процессам распада. Эти явления можно объяснить только антимикробным действием прополиса. Результаты опытов 1962 года положили начало изучению бактериостатических и бактерицидных свойств прополиса. Проводились исследования антимикробного действия прополиса-сырца, водного, спиртового, ацетонового и бензинового извлечений прополиса, прополиса, очищенного от воска, прополиса с пасек различных местностей, собранного на одной пасеке, но в разное время мёдосбора и из разных ульев, с различными сроками хранения, продукта сухой перегонки прополиса, прополисированных питательных сред и прополисовых мазей. Изучалась адаптация бактерий к прополису.

Свойства антимикробной  активности прополиса исследовались  на 72 штаммах, принадлежавших к 23 видам  микробов. После внесения кусочков прополиса в количестве 0,05, 0,1, 0,2 и 0,3 г в пробирки с 5 мл стерильного  мясо-пептонного бульона и выдерживания их в термостате  при температуре 37˚С в течение 7 дней, рост микробов прекращался за исключением пробирок с 0,05 г прополиса. В них иногда наблюдался рост грамотрицательных, неподвижных, с закруглёнными концами палочек. При длительном термостатировании мясо-пептонного бульона с прополисом в отдельным пробирках появлялась плесень. Пробирки же с 0,2 и 0,3 г прополиса оставались стерильными. Кроме того, при посеве определённых видов бактерий в мясо-пептонный бульон с кусочками прополиса, развития этих бактерий не наблюдалось [2, стр.9]. Это указывает на бактериостатические свойства прополиса.

Изучая условия  образования, сбора, хранения прополиса, естественно, можно сделать заключение, что он постоянно загрязняется микрофлорой  из окружающей среды. Тем не менее этого не наблюдается. Так, при внесении в питательные среды смыва прополиса в физиологическом растворе роста колоний не происходит или же развиваются только отдельные, более устойчивые виды. Отсутствие роста микробов также характеризует бактерицидное действие прополиса.

С помощью метода тест-объектов установлено, что более  выраженное бактерицидное действие оказывают спиртовые и ацетоновые вытяжки прополиса, в этих растворах  через сутки погибают даже споры, в отличие от бензинового, водного экстрактов и самих растворителей, не вызывающих такого эффекта [2, стр.10].

При исследовании прополисированных сред наиболее высокой  чувствительностью обладали грамположительные  микроорганизмы, особенно спорообразующие, и низкой – грамотрицательные. Различная чувствительность грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов указывает на избирательное действие веществ, экстрагируемых из прополиса в питательные среды. Сравнительное изучение бактерицидных свойств прополиса-сырца, его смоло-бальзамической части и воска отделённого от прополиса показало, что высокое содержание восковых продуктов снижает его антимикробные свойства. [2, стр.11].

Эффективность антибактериального средства может  быть связана не только с его влиянием на микроба-возбудителя, но и с изменением иммунологической реактивности макроорганизма, в частности фагоцитоза. В экспериментах на животных было обнаружено что прополис стимулирует реакции фагоцитоза. Кровь и перитонеальный экссудат контрольных животных в отличие от опытных содержали большое количество (прогрессивно возрастающее) микробов. Через 6 часов после введения прополиса в крови опытных мышей стафилококки не обнаруживались, в перитонеальном экссудате появлялись отдельные бактериальные клетки, а в то же время всё поле зрения было покрыто лейкоцитами. У животных, которым вводили прополис, не менее чем в 2 раза повышалось фагоцитарное число, изменялся клеточный состав экссудата. В первые 1,5-3 часа в фагоцитоза участвовали главным образом макрофаги, в то время как в экссудате контрольных животных доминировали лимфоциты. Участие макрофагов в фагоцитозе расценивается многими исследователями как пробуждение защитных сил организма. Существенным является ускоренное внутриклеточное переваривание стафилококков под влиянием прополиса, активация степени завершённости фагоцитоза [2, стр.13].

Полученные  результаты свидетельствуют о терапевтической  активности прополиса в организме. С одной стороны, после кратковременного воздействия прополиса бактерии перестают размножаться в организме, с другой – защитные силы организма под влиянием пчелиного клея активизируются, что выражается в активном фагоцитозе стафилококков. Механизм действия прополиса основывается не только на его антибактериальном и детоксирующем эффекте, но и на влиянии на защитные силы организма.

Были проведены  исследования влияния прополиса  на специфические и не специфические  факторы иммунитета, при совместном введении его с некорпускулярным  сальмонеллёзным антигеном, а также  плазмоцитарной реакции в лимфоидных органах при иммунизации некорпускулярным и корпускулярным сальмонеллёзными антигенами [2, стр. 14].

Для оценки результатов  эксперимента авторы использовали тесты: реакцию агглютинации и преципитации, определение содержания белка и  белковых фракций в сыворотке  крови, комплементарную активность сыворотки крови, плазмоцитарную реакцию в лимфоидных органах. С целью иммунизации животных применяли глюцидополипротеиновый комплекс (полный антиген), извлечённый из культуры S. enteritidis (var. Dublin, 1204) по методу Буравена, и корпускулярный антиген, приготовленный из культуры гомологичного штамма.

Исследования  установили, что содержание агглютининов и преципитинов в сыворотке крови  кроликов и белых крыс, иммунизированных полным сальмонеллёзным антигеном  в сочетании с прополисом, значительно выше, чем у животных, привитых другими формами этого антигена, причём уровень общего белка существенно не менялся. Введение полного антигена совместно с прополисом вызывает стимуляцию синтеза гамма-глобулина. Кроме того, иммунизация белых крыс полным антигеном с прополисом, по сравнению с другими формами этого антигена, обуславливает более раннюю перестройку как в региональных, так и в отдельных лимфатических узлах.

Всё это указывает  на возможность использования прополиса  в качестве стимулятора специфических и неспецифических факторов иммунитета.

Особенно ценными  являются сведения о бактерицидном  действии прополиса на туберкулёзную  палочку, хотя большинство клинико-экспериментальных  исследований дают умеренную оценку его эффективности в данном аспекте [4, стр. 113], [1, стр.99].

Долгое время  считалось, что поверхность туберкулёзной  микобактерии покрыта капсулой, пропитанной  жировосковыми продуктами, которые  не пропускают влагу и различные  химические вещества, чем и обусловлена  её устойчивость. Данные электронной микроскопии опровергли эту гипотезу; протоплазма туберкулёзных бактерий оказалась покрыта сверху лишь тончайшей мембраной. В связи с этим кислотоустойчивость туберкулёзных палочек стали объяснять не наличием капсулы, а составом протоплазмы самой клетки, которая богата липоидами, составляющими до 40% тела микобактерии. Они хорошо растут на специально приготовленных питательных средах. Если же к средам добавлять, например, водную вытяжку из прополиса, то рост туберкулёзных палочек задерживается [2, стр. 15].Рост этих бактерий не наблюдается, если добавить вытяжку к туберкулёзным микробам до посева их на питательные среды.

О бактерицидном  действии прополиса можно судить по воздействию на рост бактерий туберкулёза  на термостатируемых мазках, приготовленных по специальной методике: мокроту людей, больных туберкулёзом, наносили на предметные стёкла, высушивали и обрабатывали серной кислотой, предметные стёкла промывали дистиллированной водой и опускали в питательную среду для размножения туберкулёзных бактерий. В качестве питательной среды использовали цитратную кровь (лимоннокислый натрий добавляли в кровь для предупреждения её свёртывания).  Прополис расплавляли и каплю полученной жидкости прибавляли к питательной среде, в которой находились предметные стёкла с туберкулёзными бактериями. Роста туберкулёзных палочек ни в одном случае не наблюдалось. Во всех контрольных средах, куда прополис не добавляли, выявлен обильный рост туберкулёзных бактерий [2, стр. 16].

Биологически  безвредный для организма, прополис обезвреживающее действует на токсины. Было установлено, что экзотоксин дифтерийных коринебактерий после обработки водным экстрактом прополиса не вызывает у морских свинок местных изменений (некроза) и общей интоксикации организма, в то время как контрольные животные, получившие такое же количество токсина без предварительной обработки препаратом прополиса, погибают от дифтерийной интоксикации, а внутрикожное введение вызывает у них инфильтрат с последующим некрозом. Эти данные свидетельствуют о том, что применение прополиса может быть целесообразным при лечении инфекционных заболеваний, сопровождающихся интоксикацией организма (туберкулёз, дифтерия, скарлатина) [2, стр.16].

Представляет  интерес изучение антимикробной  активности антибиотиков в присутствии прополиса и влиянии его на появление антибиотикоустойчивых форм бактерий. Резистентные формы микроорганизмов, развивающиеся в результате применения антибиотиков широкого спектра действия, вызывают иногда осложнения с длительным, тяжёлым, часто рецидивирующим течением. Было обнаружено, что прополис  оказывает поливалентное действие и не вызывает образования устойчивых форм микроорганизмов. Исследования проводились на предмет активности суммарного препарата (комплекс антибиотик - прополис) [2, стр. 17]. Антимикробную активность антибиотиков (пенициллин, стрептомицин, тетрациклин, ристомицин, неомицин, левомицетин, полимиксин и олеандомицин) в сочетании с прополисом определяли методом серийных разведений в мясо-пептонном агаре, содержащем прополис в суббактериостатических концентрациях. Предварительно определяли бактериостатические концентрации антибиотиков и прополиса в отношении микроорганизмов – Staph. aureus и E. coli. Было установлено, что прополис усиливает в плотной питательной среде бактериостатическую активность стрептомицина, неомицина, пенициллина, полимиксина и тетрациклина к кишечной палочке. Адаптация бактерий к неомицину, левомицетину, и ристомицину происходит одинаково как на прополисированных, так и на обычных средах без прополиса. Но также было отмечено, что устойчивость культур к стрептомицину, тетрациклину, неомицину и полимиксину увеличивается значительно быстрее в присутствии прополиса. Отмечено также, что прополис усиливает антимикробную активность мазей с антибиотиками.