Особенности определения качества лекарственных средств из группы производных хинолина фармакопейными и нефармакопейными методами

      Для идентификации солей хинина можно  использовать осадителъные (общеалкалоидные) реактивы на органические основания: пикриновую кислоту, дихлорид ртути, танин, фосфорновольфрамовую кислоту. Подкисленный серной кислотой раствор хинина в этаноле при взаимодействии со спиртовым раствором йода образует характерные (в виде листочков) зеленые кристаллы герепатита:

      Наличие метоксильной группы в молекуле хинина можно обнаружить сплавлением с перекисью бензоила. Образуется формальдегид, который под действием хромотроповой кислоты в присутствии концентрированной серной кислоты приобретает фиолетовое окрашивание.

      Для испытаний хинидина сульфата используют те же методы и химические реакции, что и для оценки качества хинина сульфата. Небольшое различие имеется в ИК-спектрах. У хинина характерные полосы наблюдаются при 1235 и 1030 см"¹, а у хинидина — при 1262 и 1040 см"¹. Удельное вращение 2%-ного раствора хинидина в 0,1 М растворе хлороводородной кислоты в отличие от солей хинина находится в пределах от +275 до +290°.

      Соли  хинина и хинидина с солями алюминия в водной среде образуют голубую  флуоресценцию с максимумом излучения 450 нм. Реакция обусловлена образованием комплексов иона алюминия с хинином или хинидином за счет свободных электронных пар гетероатомов азота и гидроксильной группы.

      Известны  цветные реакции, позволяющие отличать хинин от хинидина. Так, если одну каплю  спиртового подкисленного серной кислотой раствора нанести на фильтровальную бумагу и в течение 30 сек обрабатывать парами йода, то в присутствии хинина появляется серовато-синее пятно с темно-желтым ободком, а в присутствии хинидина — темно-желтое пятно.

      Хинин и хинидин могут быть разделены методом ТСХ на пластинках с силикагелем в системе растворителей хлоро-форм-ацетон-диэтиламин (5:4:1). В качестве проявителя используют разведенную серную кислоту, после чего в УФ-свете обнаруживаются пятна с синей флуоресценцией. Значения Rf хинина и хинидина соответственно равны 0,19 и 0,33. 
 

      Производные 4-аминохинолина.

      Хлорохина фосфат имеет в УФ-области (240-360 нм) три максимума поглощения: при 257, 329, 343 нм (0,001 %-ный раствор в 0,01 М  растворе хлороводородной кислоты) с оптическими плотностями около 0,29, 0,32 и 0,37. Отношения этих значений при 257 и 329 нм к поглощению при 343 нм должно быть в пределах 0,86-0,95.

      Известен  ряд реакций осаждения, с помощью  которых можно подтвердить подлинность хлорохина фосфата и гидроксихлорохина сульфата. Из растворов солей под действием щелочей выпадают осадки оснований. Отличить их друг от друга можно, выполняя соответственно реакции на сульфат- (с растворимой солью бария) и фосфат-ионы (с раствором молибдата аммония). Являясь азотсодержащими органическими основаниями, они дают положительные реакции с осадительными (обшеалкалоидными) реактивами: Вагнера, Майера, Драгендорфа. С пикриновой кислотой образуют пикраты (осадки желтого цвета). Пикрат хлорохина фосфата имеет температуру плавления 204-207°С. С 5%-ным раствором дихромата калия производные 4-аминохинолина образуют оранжевые осадки. 

        Производные 8-оксихинолина.

      Для подтверждения подлинности хинозола, нитроксолина, хлорхинальдола ФС рекомендует  использовать прилагаемые рисунки ИК-спектров, с которыми должны в области 4000-400 см^-1 полностью совпадать по положению и относительным интенсивностям полос ИК-спектры испытуемых веществ.

      Для испытания подлинности используют УФ-спектры. Раствор хинозола в 0,1 М  хлороводородной кислоте в области 220-270 нм должен иметь максимум поглощения при 252 нм, а в области 270-400 нм — максимумы при 308, 320 и 360 нм. УФ-спектр 0,0005%-ного раствора нитроксолина в смеси этанол-буферный раствор с рН 9,18 (98:2) в области 220-500 нм имеет максимумы поглощения при 249, 341, 452,5 нм и два плеча — от 228 до 238 нм и от 258 до 268 нм. Растворы хлорхинальдола в хлороводородной кислоте (различной концентрации) имеют максимумы поглощения в области 290-450 нм при 330, 357 нм и плечо при 318 нм, а в области 220-290 нм — один максимум при 263 нм.

      Используемые  для испытаний производных 8-оксихинолина химические реакции основаны на наличии в молекулах фенольных гидроксилов и нитрогруппы (реакции азосочетания, комплексообразования, окисления), третичного атома азота (реакция осаждения), связанной серной кислоты (кислотно-основные свойства).

      Поскольку все три лекарственных вещества имеют в молекулах фенольные гидроксилы, для испытания их подлинности ФС рекомендует общую цветную реакцию с раствором хлорида железа (III). Растворы (водные, спиртовые или ацетоновые) приобретают зеленое окрашивание различной интенсивности.

      Наличие фенольного гидроксила в молекуле хинозола позволяет получать окрашенные азосоединения  с диазореактивом или с диазотированными первичными ароматическими аминами. Эту  реакцию используют как для идентификации, так и для фотоколориметрического определения хинозола в лекарственных формах (Н.И. Крикова).

      После гидрирования нитрогруппы в молекуле нитроксолина до ароматической аминогруппы выполняют реакцию диазотирования и азосочетания со щелочным раствором (i-нафтола. Появляется красно-оранжевое окрашивание. Наличие нитрогруппы в молекуле нитроксалина можно подтвердить реакцией с дифениламином в присутствии концентрированной серной кислоты (синее окрашивание) и по образованию ацисоли с раствором гидроксида натрия (красно-оранжевое окрашивание).

      Если  нагреть хинозол в растворе лимонной кислоты и уксусном ангидриде, то появляется пурпурно-красное окрашивание (реакция на третичный атом азота).

      Присутствие третичного азота в хинолиновом  ядре обусловливает положительные  реакции хинозола с осадительными (общеалкалоидными) реактивами: Вагнера, Майера, Драгендорфа, раствором пикриновой кислоты, а также с раствором дихромата калия (желтый осадок).

      Хинозол и нитроксалин образуют окрашенные внутрикомплексные соединения с  катионами металлов: магния, кадмия, меди (II), цинка, алюминия. При нагревании хинозола с хлороформом и раствором гидроксида натрия появляется быстроисчезающая зеленая окраска. Хинозол и другие производные 8-оксихинолина в присутствии цинковой пыли и разведенной хлороводородной кислоты гидрируются в дигидропроизводные. Последующее добавление к фильтрату нескольких капель пергидроля или бромной воды приводит к постепенному появлению красно-фиолетового окрашивания вследствие образования соединения хиноидной структуры:

      Прибавление одной капли раствора сульфата меди ускоряет эту реакцию. С ее помощью можно отличать производные 8-оксихинолина от производных цинхониновой кислоты и 8-аминохинолина, которые не образуют в этих условиях окрашенных продуктов. Нитроксолин дает эту реакцию сразу, без добавления сульфата меди.

      Сульфат-ион  в хинозоле открывают с помощью  раствора хлорида бария. При действии на раствор хинозола раствором карбоната  натрия выпадает в осадок 8-оксихинолин:

      Если  карбонат натрия взят в избытке, то он гидролизуется и осадок растворяется вследствие образования растворимого в воде 8-оксихинолината натрия:

        Фторхинолоны.

      Подлинность фторхинолонов подтверждают с помощью  ИК- и УФ-спектров, которые должны соответствовать спектрам стандартных образцов. ИК-спектры снимают после прессования в таблетках с бромидом калия. УФ-спектры растворов фторхинолонов в воде, метаноле и этаноле имеют четко выраженные максимумы поглощения в диапазоне от 270 до 300 нм. УФ-спектр водного раствора ципрофлоксацина гидрохлорида имеет максимум при 313 и 279 нм.

      Подлинность ципрофлоксацина гидрохлорида подтверждают методом ТСХ на пластинках Сорбфил  по идентичности значений Rf основного пятна у испытуемого и стандартного растворов. Используют подвижную фазу, состоящую из мети-ленхлорида-метанола-раствора аммиака-ацетонитрила (4:4:2:1). Пластинку просматривают при коротких и длинных волнах УФ-света. Для гидрохлоридов ципрофлоксацина и ломефлоксацина выполняют испытания на наличие хлорид-ионов. 
 
 
 
 
 
 
 

        Глава III. Чистота.

      Препараты не должны содержать минеральных и органических примесей. Определяют содержание хлоридов, сульфатов, некоторые тяжелые металлы. Допускается определенное содержание других алкалоидов хинной коры.

      Испытание на чистоту никтроксолина.

      При испытании на чистоту методом  ТСХ на пластинках Силуфол УФ-254 устанавливают наличие в нитроксолине примеси промежуточного продукта синтеза — 5-нитрозо-8-оксихинолина. Пластинку предварительно пропитывают насыщенным раствором трилона Б и размечают по методу «клиновидных полос». 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

      Глава IV. Количественное определение.

      Соли  хинина.

      Количественное  определение солей хинина выполняют  гравиметрическим методом. Он основан  на осаждении основания хинина из солей (раствором гидроксида натрия), четырехкратном извлечении его хлороформом и взвешивании остатка, полученного после отгонки хлороформа. Определить содержание солей хинина можно также методом нейтрализации 0,1 М раствором гидроксида натрия в смеси этанола и хлороформа (индикатор фенолфталеин). Оба способа основаны на реакции нейтрализации солей, например хинина сульфата:

      МФ  рекомендует для определения  солей хинина метод неводного  титрования в смеси ледяной уксусной кислоты и уксусного ангидрида (50:20). При определении хинина гидрохлорида и дигидрохлорида прибавляют раствор ацетата ртути в ледяной уксусной кислоте и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты (индикатор кристаллический фиолетовый).

      Известен  метод бромид-броматометрического  определения хинина гидрохлорида. В  присутствии концентрированной  хлороводородной кислоты и бромида калия титруют 0,1 М раствором бромата калия до устойчивой желтой окраски.

      Соли  хинина определяют йодометрическим  методом, основанным на образовании  полийодида в среде насыщенного  раствора хлорида натрия, а хинина гидрохлорид и хинина сульфат  — спектрофотометрическим методом (растворитель этанол или 0,1 М раствор хлороводородной кислоты). Выделенное из солей (хлороформом с этанолом 2:1) основание хинина определяют флуориметрическим методом. Для этого растворитель отгоняют, остаток растворяют в 0,1 М серной кислоте и измеряют при 430 нм интенсивность флуоресценции.

      Показана  возможность использования метода ГЖХ для качественного и количественного  анализа хинина гидрохлорида путем  прямого хроматографирования. Качественную оценку проводят, устанавливая величину отношения его времени удерживания к внутреннему стандарту (2,22 отн. ед.). Количественное определение выполняют методом внутреннего стандарта.

      Известна  методика титриметрического определения  сульфатов хинина и хинидина в  неводной среде. Вначале избытком перхлората бария осаждают сульфат-ионы в среде уксусной кислоты. Затем титруют основания хинина или хинидина в системе диоксан-уксусная кислота (2:1) раствором хлорной кислоты в безводной уксусной кислоте (индикатор кристаллический фиолетовый). Количественное определение хинидина выполняют также методом неводного титрования, растворяя навеску в смеси хлороформа и уксусного ангидрида. Титрантом служит хлорная кислота, а эквивалентную точку устанавливают потенциометрическим методом.

      Определить  содержание хинидина сульфата можно также методом ВЭЖХ на обращенных фазах с применением флуоресцентного детектора. Время удерживания хинидина составляет 5,6 мин. Оно отличается от времени удерживания дигидрохинина (6,5 мин), примесь которого в хинидине часто встречается и составляет 10-15%. Расчет содержания выполняют с помощью метода абсолютной калибровки. 
 

      Производные 8-оксихинолина.

      Водные  растворы хинозола имеют кислую реакцию (рН 5%-ного раствора 2,4-3,4) ввиду наличия  связанной серной кислоты. Это позволяет выполнять количественное определение методом нейтрализации связанной серной кислоты 0,1 М раствором гидроксида натрия (индикатор фенолфталеин). Титрование ведут в присутствии хлороформа, который добавляют для извлечения выделяющегося основания хинозола (8-оксихинолина):

      Хинозол количественно определяют обратным комплексонометрическим методом (после  перевода в основание). Основание растворяют в этаноле при нагревании до 60°С, осаждают избытком 0,1 М раствора сульфата цинка и добавляют буферный раствор (рН 10). Осадок растворяют в хлороформе, прибавляют воду и оттитровывают избыток сульфата цинка 0,1 М раствором трилона Б (индикатор эриохром черный Т).

      Обратный  броматометрический метод определения  хинозола основан на образовании 7-бромпроизводного. Избыток 0,1 М раствора бромата калия в присутствии бромида калия устанавливают йодометрическим методом: