Шпаргалка по «Медико-диагностическое дело»

Нормальное содержание креатинина:

в сыворотке крови:    мужчины   53-110 мкмоль/л женщины    44-95 мкмоль/л

в суточном количестве мочи:      8.8-15.9 ммоль/сут.

15. Определение количества мочевины в сыворотке крови.

Ответ: Исслед. материал: сыворотка, гепаринизированная, или ЭДТА-плазма крови без следов гемолиза; моча, разведенная в 100 раз в дистил. воде.

Рабочий реагент: смешать необходимое количество реагентов №1,2 и 3 в соотношении 3:1:1.

Процедура анализа: в кювете фотометра с длиной оптического пути 1 см смешайте рабочий реагент и исслед. образец ( или калибратор) в соотношении 100:1 ( 1 мл рабочего реагента и 0,01 мл исслед. образца) и через 1 мин измерьте величину экстинции при длине волны 340 нм против воды (Е1). Точно через 60 сек повторите измерение (Е2). Расчитайте величину ΔЕ=Е1-Е2.

Расчет: концентрацию (С) мочевины в плазме крови рассчит.  по формуле:

      ΔЕ пробы              ΔЕ пробы

С=-------------* 13,3 ммоль/л  или  С=------------* 80мг/100 мл

      ΔЕ калибр              Δ Е калибр

где: 13,3 ммоль/л (80 мг/100мл) – калибратор.

Нормы: у взрослых = 2,5-8,3 ммоль/л или 15-50 мг/л

У новорожденных = до 7,0 ммоль/л

16. Определение количества мочевой кислоты в сыворотке крови.

Ответ: Подготовить необходимое оборудование: спектрофотометр, пипетки, водяная баня или термостат, пробирки, кюветы.

Ход выполнения исследования:      

ü Длина волны 500-520 нм, кювета с толщиной слоя 10 мм.

ü Монореагент и калибровочный раствор готовы к использованию.

ü Монореагент после вскрытия флакона может храниться не менее 6 месяцев при 2 - 8 °С в темном месте.

ü Бледно-розовая окраска монореагента до оптической плотности 0,200, измеренная относительно дистиллированной воды при λ=500 нм, не влияет на правильность определения мочевой кислоты в исследуемом образце.

ü Определение концентрации мочевой кислоты проводят в сыворотке крови, плазме крови и моче. Мочу перед анализом разводят дистиллированной водой в соотношении 1: 9 и результат умножают на коэффициент разведения(10).

ü Для проведения анализа отбираются компоненты в количествах, согласно таблице

Обьем в ml	Опытная проба	Калибровочная проба	Холостая проба
Сыворотка, плазма крови или разведенная моча	0,025	-	-
Калибровочный раствор	-	0,025	-
Монореагент	1	1	1

Реакционную смесь перемешивают и инкубируют 5 мин. при температуре 37 °С .

Измеряют оптическую плотность опыт¬ной пробы (Апр) и калибровочной пробы (Акали6р) относительно холостой пробы. Стабильность окраски 15 мин.

Концентрацию мочевой кислоты в исследуемой жидкости (Спр) в мкмоль/л определяют по формуле:

Спр=Скалибр *Апр/Анали6р,

где Скалибр - концентрация калибровочного раствора мочевой кис¬лоты, которой соответствует оптическая плотность Акалибр

Линейная область определения до 1200 мкмоль/л.

Нормальные величины

в сыворотке:   женщины-140-340 мкмоль/л;

мужчины - 200-415 мкмоль/л;

в моче 1,5 - 4,5 /24 часа

 

17. Определение активности АЛТ в сыворотке крови.

Ответ: Подготовить необходимое оборудование: спектрофотометр, пипетки, термостат, пробирки, кюветы, дозаторы.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РЕАГЕНТА

Для приготовления рабочего реагента смешивают Реагент 1 и Реагент 2 в

соотношении 4 +1.

Ход выполнения исследования:

ü Длина волны 340 нм, температура измерений 37°С, кювета 1 см.

ü В термостатируемую кювету помещают 1000 мкл рабочего реагента, прогревают содержимое до температуры определения 5 мин.

ü Затем добавляют 100 мкл исследуемого материала и тщательно перемешивают.

ü Инкубируют 1 минуту при температуре 37°С (время инкубации отсчитывается от момента прибавления пробы), измеряют оптическую плотность раствора по отношению к воздуху или воде.

ü Точно через 2 мин повторяют измерения.

ü Вычисляют среднее изменение оптической плотности за 1 минуту (∆А/мин).

РАСЧЁТ

ü Каталитическую активность АЛТ (в Е/л) в исследуемой пробе определяют по формуле:

Е/л = ∆А/мин х F

Величина F при λ. = 340 нм, длине оптического пути 1 см и 37°С:

F=1746

ü НОРМАЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ

ü Активность АЛТ в Ед/л при температуре измерений 37°С в сыворотке и плазме крови:

- мужчины до 42 Е/л

-женщины до 32 Е/л

18. Определение «С» - реактивного белка.

Ответ: Подготовить необходимое оборудование: шпатель, дозаторы.

Биологический материал для исследования: сыворотка крови и моча.

Ход выполнения исследования:

Качественное определение:

ü Поместить последовательно в лунки тест-пластины исследуемые образцы сыворотки в объёме 20мкл .

ü Рядом нанести по 20 мкл Реагента № 1.

ü Быстро смешать содержимое двух капель в лунке до гомогенного состояния.

ü Для каждой лунки желательно использовать индивидуальный шпатель.

ü Вращать тест-пластину вручную или на механической мешалке со скоростью 80-100 об/мин в течение 2 минут.

ü Развитие процесса агглютинации необходимо наблюдать в промежутке со 2-ой по 3-ю минуту от момента начала вращения тест-пластины.

ü Затягивание процесса считывания результата может привести к регистрации ложной агглютинации, возникающей в процессе подсыхания реакционной смеси.

ü ОЦЕНКА И РАСЧЕТ  КОНЦЕНТРАЦИИ: Четко видимые агрегаты латексных частиц на прозрачном фоне свидетельствуют о кон-центрации СРБ > 6 мг/л,     мелкие   агрегаты - о концентрации близкой к 6 мг/л, равномерно-гомогенная    молочная   суспензия   указывает   на   концентрацию СРБ ниже 6мг/л.

НОРМАЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ: до 6 мг/л.

19. Определение количества глюкозы в сыворотке крови.

Ответ: Подготовить необходимое оборудование: термостат, спектрофотометр, пипетки, кюветы.

Ход выполнения исследования:

Отмерить (мл)	Опытная проба	Стандарт	Холостая проба
Сыворотка, плазма, моча	0,01
Стандарт глюкозы	0,01
Дистил. вода			0,01
Рабочий реагент	1,00	1,00	1,00

Длина волны 510 нм (сине-зеленый светофильтр), кювета с рабочей шириной 10 мм.

üРеакционную смесь перемешивают и инкубируют 15 мин при 37 °С при предварительно прогретом рабочем растворе. Измеряют оптическую плотность опытной пробы Аоп и стандартной пробы АСТ против холостой пробы. Стабильность окраски 15 мин.

üРасчет концентрации глюкозы производят по формуле:

 Аоп

Соп=   Аст   . Сст,

где Соп — концентрация в опытной пробе (ммоль/л);

Аоп - оптическая плотность опытной пробы;

АсТ - оптическая плотность стандарта;

Сст — концентрация стандарта (5,55 или 16,0 ммоль/л).

Нормы: 3,5-6,2 ммоль/л

20. Определение активности щелочной фосфотазы.

Ответ: Исследуемый материал: сыворотка или гепаринизированная плазма крови без следов гемолиза.

Рабочий реагент: смешайте необходимое количество реагентов №1 и №2 в соотношении 4:1.

Процедура анализа: перед началом работы доведите температуру рабочего реагента до t исследования.

В кювету фотометра с длиной оптического пути 1 см внесите 1 мл рабочего реагента и 0,025 мл исслед. пробы. Тщательно перемешайте и через 1 мин измерьте исходную экстинцию при длине волны 405 нм против воздуха. Повторите измерение 3 раза в течении 3 мин через 1 мин. Общее время реакции не должно превышать 6 мин. Вычислите среднюю величину изменения экстинции за 1 мин – ΔЕ/мин.

Расчет активности ЩФ произвести по формуле:

Ед/л=3571*ΔЕ/мин,   где

ΔЕ/мин – среднее изменение экстинции за 1 мин;

3571 – фактор пересчета.

Норма: мужчины = 40-117Ед/л

    женщины = 35-104Ед/л