Шпаргалка по «Медико-диагностическое дело»

Перечень вопросов для контрольного среза,

Курс  4, практические занятия

По специальности «Медико-диагностическое дело»

По дисциплине: Биохимия с КБИ.

1. Подготовка пациента к биохимическим исследованиям.

Ответ: при подготовке пациента к исследованию следует учитывать факторы, влияющие  на биохим. показатели: возраст, пол, вредные привычки, физич. активность, стресс и т.д. Не рекомендуется проводить забор крови для исследований сразу после процедур, рентген. облучения, после приема алкоголя, наркотиков. Длительное наложение жгута при взятии крови из вены приводит к увеличению концентрации кальция, общего белка, искажению результатов коагулограммы и т.д. Брать кровь у больного нужно в положении сидя, иначе изменяется концентрация калия, кальция, холестерина и др. показателей. Положительные и отрицательные эмоции перед взятием крови изменяют показатели адреналина, глюкозы, калия, клеток крови. На результаты лабораторного анализа влияют лекарственные препараты.

Лаб. Исследования проводятся у пациентов натощак, утром спустя 10-12 часов после приема пищи.

В бланке направления должно быть указано: ФИО, дата рождения и пол пациента; адрес пациента, больницы, № отделения и палаты; клинический диагноз, проводимое лечение; вид исслед. материала; дата и время взятия материала; ФИО и подпись врача.

2. Определение активности ɋ-амилазы в сыворотке крови.

Ответ: Исслед. материал: сыворотка или гепаринизированная плазма крови, моча.

 Раб.  реагент: смешайте необходимое количество реагентов №1 и №2 в соотношении 4:1.Перед проведением анализа нагрейте рабочий реагент до 37С.

Ход работы: В кювете фотометра с длинной оптического пути 1см смешайте рабочий реагент с исслед. материалом в соотношении :

Реагент: сыворотка(плазма)=25:1;                 реагент: моча=50:1 

Тщательно перемешайте и инкубируйие в течении 3-х минут при t=37С.Измерьте исходную величину экстинции, а затем с интервалом в 1 мин повторить измерения в течении 3-х мин при длине волны 405 нм против воздуха. Вычислите среднее изменение экстинции за 1 мин (∆Е/ мин).

Расчет активности фермента  (Ед/л) проведите по формуле:

Сыворотка/плазма :              Ед/л=8207*(∆Е/ мин)

Моча:                                        Ед/л=16098*(∆Е/ мин)

 

Нормальные величины :

 

t исследования	25С	30С	37С
Сыворотка/плазма	До 120 Е/л	До 160 Е/л	До 220 Е/л

3. Требования к забору крови на исследование липидного обмена.

Ответ: кровь для анализа содержания липидов берут у обследуемого утром натощак, через 12-14 ч после последнего приема пищи. В течении 2 нед до взятия крови необходимо прекратить использование лекарственных препаратов, влияющих на липидные обмен. Взятая цельная кровь может храниться при 4 °С не более 3 ч.

4. Техника получения сыворотки крови.

Ответ: для получения сыворотки крови в пробирку берут цельную кровь без антикоагулянта. В течении 5-10 мин такая кровь свертывается, т.е. из нее выпадает сгусток фибрина красного цвета благодаря наличию в нем эритроцитов. Над фибриновым сгустком собирается сыворотка, которая в норме светло-соломенного цвета. Для более быстрого получения сыворотки пробирку с кровью центрифугируют в течение 10-15 мин при скорости 1500об/мин, а затем с помощью пипетки отбирают сыворотку от сгустка. Сыворотка крови – это плазма, лишенная фибриногена, который в процессе свертывания крови превращается в сгусток (фибрин) и выпадает в осадок.

5. Техника получения плазмы крови.

Ответ: для получения плазмы крови необходимо предотвратить процесс свертывания крови, для чего предварительно в пробирку вносят антикоагулянт. После центрифугирования в течении 7-10 мин при 1500об/мин отделяют плазму от клеточных элементов крови и используют для тех или иных исследований. Следует помнить, что плазму отделить от эритроцитов, а сыворотку – от сгустка нужно не позже, чем через 1 час после взятия крови, иначе результаты исследования будут искажены. Если выполнение анализа задерживается, то сыворотку или плазму хранят в холодильнике или замораживают при -20 °С. Замороженные пробы могут храниться в течение 3 мес.

6. Определение активности АСТ в сыворотке крови.

Ответ: Подготовить необходимое оборудование: спектрофотометр, пипетки, термостат, пробирки, кюветы, дозаторы.

Для приготовления рабочего реагента смешивают Реагент 1 и Реагент 2 в

соотношении 4 +1.

Ход выполнения исследования: длина волны 340 нм, температура измерений 37°С, кювета 1 см. В термостатируемую кювету помещают 1000 мкл рабочего реагента, прогревают содержимое до температуры определения 5 мин. Затем добавляют 100 мкл исследуемого материала и тщательно перемешивают.Инкубируют 1 минуту при температуре 37°С (время инкубации отсчитывается от момента прибавления пробы), измеряют оптическую плотность раствора по отношению к воздуху или воде. Точно через 2 мин повторяют измерения. Вычисляют среднее изменение оптической плотности за 1 минуту (∆А/мин).

Каталитическую активность АСТ (в Е/л) в исследуемой пробе определяют по формуле:

Е/л = ∆А/мин х F

Величина F при λ. = 340 нм, длине оптического пути 1 см и 37°С:

F=1746

Норма: - мужчины до 37 Е/л

-женщины до 31 Е/л

7. Программирование фотометра «СОЛАР» по предложенной методике.

Ответ: 1) из основного меню выбрать «Запись программы» → «Ввод»

2) Далее выбрать номер  программы → «Ввод»

3) Выбрать режим → «Ввод»

4) Задать режим по фактору  или по стандарту → «Ввод»

5) Выбрать длину волны  → «Ввод»

6) Выбрать режим «Без  бланков» → «Ввод»

7) Выбрать единицы измерения  → «Ввод»

8) Указать численное значение  фактора или концентрацию стандарта  → «Ввод»

9) Указать полярность  фактора → «Ввод»

10)Для кинетической методики  ввести ЛАГ фазу → «Ввод»

11) Ввести фазу → «Ввод»

12) Указать количество  фаз → «Ввод»

13) Выбрать наименование  теста → «Ввод»

Если данные внесены верно, подтверждаем записанную программу нажатием «Ввод»

8. Выполнение теста толерантности к глюкозе.

Ответ: для подтверждения диагноза СД  исследуют содержание глюкозы в крови через 2 ч после приема обследуемым пищи, эквивалентного примерно 75-100 г углеводов, или при нагрузке  50-75 г глюкозы. В норме у здоровых лиц уровень глюкозы натощак не должен превышать 6,7 ммоль/л. В противном случае есть основания предполагать наличие у пациента СД.

Проба с однократной нагрузкой глюкозой : на протяжении 3 суток до проведения нагрузки пациент должен придерживаться диеты, не слишком богатой белком и жирами.

Однократная нагрузка глюкозой заключается в приеме внутрь 50-75 г глюкозы, растворенной в 150-200 мл теплой воды или слабого чая и выпивают в течении 5 мин. Количество глюкозы для нагрузки зависит от массы пациента и назначается эндокринологом. Кровь из пальца берут до нагрузки, а также через 1 и 2 ч после приема глюкозы. Через 1 ч глюкоза остается повышенной, а через 2 ч снижается до нормы.

9. Условия повышения надёжности аналитического определения глюкозы.

Ответ: стабильность глюкозы в пробах во многом определяется возможностью загрязнения биологических жидкостей и зависит от интенсивности в них гликолиза. Эффект гликолиза может быть ограничен осаждением белка после взятия крови и добавлением к пробе ингибиторов этого процесса. Чтобы получить точные результаты, необходимо немедленное центрифугирование крови и отделение сыворотки от сгустка либо осаждение белков с помощью трихлоруксусной кислоты. Глюкоза в пробах сыворотки или плазмы крови ( без эритроцитов) стабильна в течении 4 ч при 30°С и 24 ч при 4°С.

10. Определение уровня общего холестерина.

Ответ: ХЛ определяется энзимотическим калориметрическим методом.

Исслед. материал: сыворотка, гепаринизированная или ЭДТА – плазма крови без следов гемолиза.

АНАЛИЗ

Подготовьте пробы след. состава	Опытная проба	Калибр.  проба	Контрол. проба
Монореагент, ml	1,0	1,0	1,0
Сыв. или плазма крови, ml	0,01	-	-
Калибратор, ml	-	0,01	-
Дисстил. вода, ml	-	-	0,01

Содержимое пробирок перемешать и инкубировать 15 мин при t=18-25°С, или 10 мин при t=37°С. Измерить оптическую плотность опытной и калибровочной пробы против контрольной пробы при длине волны 500нм(490-520нм). Окраска стабильна не менее 2 ч после инкубации.

Концентрацию (С) общего ХЛ рассчит. по формуле :

      Е пробы     Е пробы

С=---------------* 200мг/100ml   или     С=-----------------*5,17 ммоль/л

      Е калибр.     Е калибр

Е пробы – оптич. плотность исслед. пробы,

Е калибр – оптич. плотность калибр. пробы,

200мг/100ml и 5,17 ммоль/л – концентрация ХЛ в калибраторе.

Норма : 2,8-5,17 ммоль/л(108-200мг/100ml)

Пограничные показатели: 5,17-6,50 ммоль/л(200-250мг/100ml)

Патология: выше 6,50 ммоль/л(250мг/100ml) 

11. Определение уровня триглицеридов.

Ответ: Схема пипетирования:

в кюветы пипетировать	Холостая проба	Стандартная проба	Опытная проба
проба	-	-	10мкл
стандарт	-	10мкл	-
монореагент	1000мкл	1000мкл	1000мкл
Перемешать  и инкубировать 10 мин при 20-25 ° С или 5 мин при 37 ° С. Не позднее 60 мин измерить поглощение стандартой пробы (Астандарта) и опытной пробы (Апробы) относительно холостой пробы.

                                                               А пробы

Расчет : С триглицеридов = 2,28*--------------- (ммоль/л)

          Астандарта

Норма в плазме/крови:

Ж: 0,40 – 1,54 ммоль/л

М: 0,45 – 1,82 ммоль/л

Клиника : подозрение : выше 1,71 ммоль/л

Высокий риск : выше 2,28 ммоль/л

12. Расчет коэффициента атерогенности.

Ответ:в норме ƣ-ХС равны 0,9-1,9 ммоль/л.

  Коэффициент атерогенности (КА) рассчитывают по формуле:

ХС – ƣ-ХС

КА=---------------

Ƣ-ХС

У здоровых людей в норме он составляет 2-3.

13. Определение концентрации общего белка.

Ответ: Подготовить необходимое оборудование: спектрофотометр, кюветы, пипетки, дозаторы.

Материал для исследования: сыворотка крови.

Ход исследования :

	Опытная проба	Холостая проба
Сыворотка крови (мл)	0,02	-
Биуретовый реактив (мл)	1	1
Физиологический раствор (мл)	-	0,02

Пробы тщательно перемешать, избегая образования пены и инкубировать 30 мин при 18-250С. Замереть на спектрофотометре изменения оптической плотности относительно холостой пробы. Длина волны 540-560нм.    

Нормы: у взрослых: 65-85г/л  

Дети: 58-87г/л 

14. Определение концентрации креатинина в сыворотке крови.

Ответ: Подготовить необходимое оборудование: спектрофотометр, пипетки, водяная баня или термостат, пробирки, кюветы.

Приготовление рабочего раствора:

ü Растворы пикриновой кислоты и гидроксида натрия доводят до температуры измерения оптической плотности (18-25°С) выдерживанием в помещении лаборатории либо, лучше, в термостате (при 25°С).

ü В емкости из бурого стекла смешивают оба компонента в соотношении 1:1. Полученный раствор может быть использован через 20 минут после приготовления.

Ход выполнения исследования:      

ü К 1.0 мл рабочего раствора добавляют 0.1 мл исследуемой биологической жид¬кости.

ü Пробу перемешивают, вносят в кювету фотометрического измерительного прибора и спустя 30 и 120 секунд после добавления анализируемой жидкости к реагенту измеряют оптическую плотность в области длин волн 490-510 нм при 25 °С (в случае, если измерение проводится при других температурах, руководствоваться примечанием 4).

ü Находят разность значений показателей оптической плотности второго и первого измерений.

ü Аналогичные операции выполняют также с 0.1 мл (или другим объемом, соответствующим объему исследуемой биологической жидкости) стандартного раствора креатинина.

Расчет концентрации креатинина в пробе (С, мкмоль/л) проводят по формуле:

С=(∆Аобразца /∆Астандарта)х177,

где ∆Аобразца и ∆Астандарта — значения разностей показателей оптической плотности вторых и первых  измерений опытного образца и стандарта;

177 — концентрация креатинина (мкмоль/л) в стандартном растворе.

При более низкой температуре (ниже 25 °С) рекомендуется увеличить длительность проведения реакции до 10 секунд на каждый градус; при Т = 37 °С (спектрофотометр РУ-1251 С "СОЛАР") следует проводить измерения через 20 и 60 секунд после начала реакции.