Возбудитель бруцеллеза

Агглютинация в трипафлавине, а также реакция термопреципитации бактериальной суспензии объясняются изменением коллоидного состояния протоплазмы клетки вследствие относительного нарастания белкового компонента и перехода его из гидрофильного в гидрофобное, состояние в процессе, диссоциации культуры.

Дополнительными методами для определения  состояния-культуры являются солевая  агглютинация (в 2; 5; 10% растворах поваренной соли) и агглютинация в растворе основного фуксина (1 : 1000), приготовленного ex tempore. Для солевой агглютинации одномиллиардная взвесь в дистиллированной воде 48-часовой агаровой культуры смешивается в равных объемах с растворами хлористого натрия. Пробирки выдерживаются в термостате при температуре 56° в течение 24 часов. При наличии диссоциации происходит агглютинация культуры, степень которой определяется следующим образом: агглютинация в 1 % растворе оценивается как + + +, в 2,5% как ++, в 5% как +.

При использовании фуксина взвесь культуры также смешивается в  равных объемах с краской. Пробирки выдерживают в течение 2 часов  в термостате при температуре 37°, после чего производят предварительный  учет. Окончательную регистрацию  результатов осуществляют через 24 часа пребывания взвесей при комнатной  температуре.                                                                                                                   

Серологическая  диагностика

 Для  серологического исследования направляют  кровь или сыворотку крови  и молоко.

 Применяют пробирочную реакцию агглютинации (РА), реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию длительного связывания комплемента (РДСК), пластинчатую реакцию агглютинации с роз-бенгал антигеном (роз-бенгал проба - РБП) и кольцевую с молоком (КР). [2]

РА ставят в объёме 1 мл с единым бруцеллёзным антигеном для РА, РСК, и РДСК. Сыворотки крови овец, коз, буйволов, оленей и собак исследуют в  разведении 1:25, 1:50, 1:100, 1:200; крупно рогатого скота, лошадей и верблюдов – 1:50, 1:100, 1:200 и 1:400. РА считают положительным при наличии агглютинации с сыворотками крови крупно рогатого скота, лошадей и верблюдов начиная с разведения 1:100 (100 МЕ); овец, коз, буйволов, оленей и собак – с 1:50 (50 МЕ) с сыворотками крови крупно рогатого скота, лошадей и верблюдов и 1:25 (25 МЕ) – с сыворотками овец, коз, буйволов, оленей и собак с оценкой не менее чем на два креста.

РСК –  Специфичный и высокочувствительный метод диагностики бруцеллёза животных. Её показания более постоянны  и сохраняются дольше: комплементсвязывающие  антитела появляются  позже, чем  агглютинины. Эта реакция позволяет выявить большее количество больных в стадах с давней инфекцией. РСК применяют при диагностике бруцеллёза у выше перечисленных видов животных, а также свиней.

РДСК  – более чувствительный тест, чем  РСК. При инфицированном эпидидимите  баранов используют только РДСК с  овисным антигеном. РСК и РДСК считают положительными при задержке гемолиза на 2…4 креста в одном или двух разведениях (1:5 или 1:10) и полном гемолизе эритроцитов в контрольной пробирке (без антигена). Сомнительной – при задержке гемолиза с оценкой в один крест.

РПБ –  используют для исследования сывороток  крови крупного рогатого скота, овец, коз, лошадей свиней, буйволов, верблюдов  и оленей. Реакцию проводят при  температуре 18-30 °С с бруцеллёзным антигеном, окрашенным бенгальским розовым, на пластинках с лунками. При положительной реакции в течение 4 мин. Появляются мелкие или крупные хлопья агглютината розового цвета.

КР –  ставят с цельным свежим или консервированным формалином молоком коров и антигеном  – взвесью убитых бруцелл, окрашенных в синий цвет гематоксилином. При наличии в молоке специфических антител происходит агрегация антигена, образовавшийся комплекс адсорбируется сливками молока и поднимается с ними вверх, образуя чёткое, окрашенное кольцо. Проводится реакция в уленгутовских пробирках, в которые вносят по 0,05мл антигена, добавляют 1 мл молока и содержимое тщательно смешивают, выдерживают при 37-38 °С  в течении 1 часа. Результаты учитывают визуально и оценивают в крестах: +++ - чётко выраженное синее кольцо в верхней части молока, остальная часть молока белая; ++ - достаточно выраженное синее кольцо, столбик молока синеватого цвета. Пробы, давшие реакцию с оценкой три и два креста, считают положительными. Эта реакция показательна для проверки благополучия стад (ферм) по бруцеллёзу крупного рогатого скота и молока на рынках. [3]

Аллергическая диагностика

 Основывается на явлении инфекционной аллергии к аллергену бруцеллин ВИЭВ. Бруцеллин ВИЭВ, изготовляется из неаглютиногенного и авирулентного штамма B. аbortus B-1. Бруцеллин вводят под кожу нижнего века. У овец, коз и крупно рогатого скота применяют пальцебральную пробу. Овцы и козы по 0,5 мл, КРС по 1 мл, учёт через 48 часов. Свиньям препарат вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины. У животных, больных бруцеллёзом, на месте введения бруцеллина развивается воспалительная реакция. [3]

У людей  применяется проба Бюрне. Для постановки реакции Бюрне бруцеллин в дозе 0,1 мл вводят строго внутрикожно в среднюю треть ладонной поверхности предплечья. Через 6—12 часов на месте инъекции появляется отек и покраснение, которые достигают максимального развития через 24 и 48 часов, после чего постепенно угасают. Однако необходимо помнить, что в редких случаях внутрикожная проба становится положительной к 72 часам — это так называемые поздние реакции. При оценке реакции принимают во внимание главным образом воспалительный болезненный отек; гиперемия кожи на месте инъекции без отека диагностического значения не имеет. Отсутствие болезненности и изменение цвета кожи, обычно сопровождающих отек, не исключает положительной оценки пробы.

Генетическая  диагностика

Применяют полимеразную цепную реакцию (ПЦР).

 Биопроба

Осуществляют  на морских свинках (параллельно  с посевами материала на питательные  среды), сыворотка которых в разведении 1:5 отрицательно реагирует  в РА с  бруцеллёзным антигеном. На 15, 25 и 40 – е сутки после заражения берут кровь, из которой получают сыворотку и исследуют её в пробирочной РА в титрах от 1:10 до 1:80. При получении положительных результатов морских свинок  убивают (через 60 дней) и из органов (лимфоузлов, селезёнки, печени и костного мозга) делают посевы на питательные среды с целью выделения культуры бруцелл. При выделении культуры возбудителя или получении положительного результата, когда сыворотка реагирует в титре 1:10 и выше лабораторный диагноз бруцеллёза считают установленным. Для выделения культуры морских свинок убивают и делают посевы из лимфоузлов, селезёнки, печени и костного мозга.

Все выделенные культуры бруцелл после их идентификации уничтожают автоклавированием при 1,5 атм. В течение 1 часа. [4]

Иммунитет

Иммунитет при  бруцеллёзе малонапряжённый и непродолжительный, от нескольких месяцев до двух лет.  Противобруцеллёзный иммунитет формируется медленно в две фазы: первая фаза – инфекционный, или нестерильный, иммунитет; вторая – постинфекционный, или стерильный, иммунитет. Нестерильный иммунитет обусловлен присутствием возбудителя в организме.

В обезвреживании бруцелл принимают участие гуморальные факторы (опсонины, агглютинины, комплементсвязывающие вещества и не полные антитела).  В сыворотке крови больных животных накапливаются в начале IgM , затем IgG , а также неполные (IgA  и IgG) антитела. Роль антител в механизме защиты при бруцеллёзе неэффективна: присутствие их в организме не препятствует бактериемии. Но они имеют большое диагностическое значение. В первой фазе отмечается угнетение макрофагальной реакции и фагоциты не способны переваривать бруцелл, что и приводит к диссеминации возбудителя по всему организму. [3]

Иммунитет при  бруцеллёзе клеточный (ГЗТ) и обеспечивается Т-системой лимфоцитов. Для бруцеллёза характерно развитие гиперчувствительности  замедленного типа (аллергия). Инфекционный иммунитет переходит в постинфекционный постепенно и сопровождается освобождением организма от возбудителя, в результате чего может наступить самовыздоровление. [9]

 

Лечение и профилактика

При остром и хроническом бруцеллезе с выраженными признаками активности необходимо назначение антибиотиков широкого спектра. Наибольшую антибактериальную активность по отношению к бруцеллам проявляют препараты тетрациклинового ряда, особенно доксициклин; рифампицин, хлорамфеникол; фторированные хинолоны – флероксацин, пефлоксацин, офлоксацин, ципрофлоксацин, ломефлоксацин, а также гентамицин, сизомицин, мономицин и другие аминогликозиды; беталактамный карбапенемный антибиотик меропенем; макролид азалидного ряда – азитромицин. [5] Антибиотики не действуют на бруцеллы, расположенные внутриклеточно, поэтому их можно назначать только при наличии бактериемии, а при хроническом бруцеллезе они неэффективны. Кроме того, антибиотики не предупреждают рецидивов бруцеллеза, поэтому широко применяется специфическая иммунотерапия убитой лечебной бруцеллезной вакциной (5—7 внутривенных вливаний в нарастающих дозах 1—2 раза в неделю) или бруцеллина (внутримышечно 2 раза в неделю). При острых и рецидивирующих формах назначают бруцеллезный иммуноглобулин.

Для специфической  профилактики применяют живую бруцеллезную вакцину, предложенную П.А. Вершиловой из штамма ВА-19А, полученную из В. abortus и создающую перекрестный иммунитет по отношению к дпугим видам бруцелл. Вакцинацию проводят по эпидемиологическим показаниям. Неспецифическая профилактика такая же, как и при других зоонозах, и сводится в основном к санитарно-ветеринарным мероприятиям.

 

Заключение

Бруцеллёз, как и любое другое инфекционное заболевание сельскохозяйственных животных, легче предупредить, чем  потом проводить мероприятия  по его ликвидации. Поэтому руководителям, зооветспециалистам хозяйств, работникам животноводческих ферм необходимо строго соблюдать ветеринарно-санитарные правила по охране животных от заражения различными инфекционными возбудителями, перекрыть все пути возможного заноса возбудителя бруцеллёза в хозяйство. [8]

Для полной ликвидации заболевания необходимо исследовать всех восприимчивых  животных, имеющихся на фермах и  личных хозяйствах, неблагополучных  по бруцеллёзу. Положительно и сомнительно  реагирующих на бруцеллёз надо изолировать  и подвергнуть убою; провести санитарно-ветеринарные мероприятия; уничтожить возбудителя  бруцеллёза во внешней среде с  помощью дезинфекций ; провести специфическую вакцинопрофилактику для создания иммунного стада здоровых животных; изолированно выращивать здоровый молодняк; ввести рациональное кормление и содержание для создания физиологической устойчивости животных. [7]

В настоящее  время, исходя из достижений биологической  науки, опыта практики и учёта  этиологии, наиболее перспективным  направлением в разработке средств  специфической профилактики бруцеллёза животных является конструирование  инактивированных адъюват-вакцин из диссоциированных штаммов бруцелл в R-форме, которые создавали бы у привитых животных иммунитет высокой напряжённости и в тоже время не вызывали образования антител к стандартным бруцеллёзным S-антигенам. [6]

Разрабатываются и внедряются более эффективные, научно обоснованные комплексные системы  оздоровления хозяйств и профилактики бруцеллёза, увязывающих в единую технологию карантинные, организационно-хозяйственые, общие санитарные и специальные ветеринарные (вакцинация, диагностика, химиопрофилактика) мероприятия.

Такие комплексные  системы, основанные на передовом опыте  борьбы  с болезней, последних  достижениях отечественной науки, инструктивных и карантинных  требованиях, имеются на вооружении практики. [3]

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Список  литературы

1. Зверев В.В. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. В 2-х томах. Том 2, 2010г. 
2. Костенко Т.С., Скаршевская Е.И., Гительсон С.С «Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии». Москва. «агропромиздат» 1989г. стр. 272.
3. Колычев Н.М., Росманов Р.Г. «Ветеринарная микробиология и иммунология» Москва «Колос» 2003г. стр.432
4. Ассонов Н.Р. «Микробиология». Москва. «Колос» 2002. стр.-350.
5. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики бруцеллеза для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней. Методические указания. М. – Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011 г. – 65 с.
6. Обоснея Р.Б.«Иммунология, диагностика и лечение инфекционных болезней сельскохозяйственных животных».Новосибирск 1986г.  стр.60-63
7. Селиверстов В.В., Шумилов К. В. «Результаты производственного испытания адъювант-вакцины против бруцеллёза крупного рогатого скота» Ветеринария – 2001г. №6 стр.10-12
8. Косилов И.А., Новицкий А.А. «Меры борьбы с бруцеллёзом и туберкулёзом крупного рогатого скота» Ветеринария-1987г.№7 стр.6-8.
9. Маскаев Н.Н. «Бруцеллёз сельскохозяйственных животных» Омск 1989г. стр. 20-26.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Приложение 1 - Схема лабораторной диагностики бруцеллеза