Возбудитель бруцеллеза

МОСКОВСКАЯ  ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ

ВЕТЕРИНАРНОЙ  МЕДИЦИНЫ И БИОТЕХНОЛОГИИ ИМЕНИ  К.И.

СКРЯБИНА

 

ФАКУЛЬТЕТ

Ветеринарной  медицины

 

 

 

 

РЕФЕРАТ

 

По курсу:

МИКРОБИОЛОГИЯ

 

На тему:

Возбудитель бруцеллеза

 

Выполнила:

студентка 3 курса

5 группы  ФВМ

вечернего отделения

Козина  А.А.

 

 

 

 

 

 

Москва, 2012

Оглавление

 

Введение 2

Морфология 4

Культуральные свойства 5

Факторы патогенности 6

Лабораторная диагностика 7

Патологический материал 7

Бактериологическая диагностика 8

Серологическая диагностика 11

Аллергическая диагностика 13

Генетическая диагностика 13

Биопроба 13

Иммунитет 14

Лечение и профилактика 15

Заключение 16

Список литературы 18

Приложение 1 19

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Введение

Бруцеллы являются возбудителями бруцеллеза — острого или хронического антропозоонозного инфекционного заболевания, которое характеризуется интоксикацией, преимущественным поражением опорно-двигательного аппарата, нервной, сердечно-сосудистой, мочеполовой систем и других органов, аллергизацией организма, затяжным течением, приводящим, как правило, к инвалидизации.

Возбудитель – бактерии рода Brucella: B. melitensis (три биовара) – основной хозяин мелкий рогатый скот (МРС); B. abortus (девять биоваров) – хозяин крупный рогатый скот (КРС); B.suis – хозяин свиньи и зайцы; B.ovis – овцы; B.canis - собаки; B.neotomae - древесные крысы.

Симптомы бруцеллеза у людей  были известны еще Гиппократу. Бруцеллы обнаружил в 1886 г. Д. Брюс, микроскопируя мазки из селезёнки солдата, умершего от мальтийской лихорадки, а в 1887 г. он выделил чистую культуру и возбудителя назвал Micrococcus melitensis.  Банг и Стрибольт (1897) из околоплодной жидкости коровы выделили второй вид - B.abortus bovis; Траум (1914) от  абортировавшей свиньи  - третий вид-B.abortus suis. В 1920 г. Майер и Фезье объединили эти три микроба в одну группу и предложили отнести эти микроорганизмы к роду Brucella и назвали их бруцеллами  в честь открывшего их Брюса.

Бруцеллез животных широко распространен  во многих странах мира. Он наносит  значительный экономический ущерб  из-за массовых абортов, яловости, выбраковки продуктивных животных, потери ценных производителей, нарушения племенной  работы, затрат на противоэпизоотические  мероприятия и т.д. Кроме того, больные животные служат основным источником заражения бруцеллезом человека.

Морфология

Бруцеллы — мелкие грамотрицательные короткие бактерии (0,4—0,6x0,5—3 мкм) шаровидной, овоидной или палочковидной формы. Спор не образуют, неподвижны. В окрашенных препаратах располагаются одиночно, парами или небольшими группами.

При действии специфического бактериофага или при культивировании на среде с 10% иммунной сывороткой образуют нежную капсулу.

Окраска по грамму не является определяющей, это связано с размерами бруцелл, используют дифференциальные методы  окраски бруцелл - окраска по Козловскому, окраска по Стампу. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. Оба метода окраски по Козловскому и по Стампу дают следующую микроскопическую картину - бруцеллы красные, другие микроорганизмы и фон препарата синего (зеленого) цвета (см. рис.1).

 

Рис.1 Окраска бруцелл по Стампу

 

 

 

Культуральные свойства

Аэробы, капнофилы. В.abortus и  B.ovis - микроаэрофилы, первые их генерации выращивают в условиях при содержании 10...15% СО2.  Могут расти на обычных питательных средах при температуре 36°-38°С и PH 6,8-7,2, однако для их культивирования используют специальные среды: мясо-пептонный печёночны бульон (МППБ) и мясо-пептонный печёночный агар (МППА) с глицерином и глюкозой с добавлением генцианвиолета (1:2000000) или ацетата натрия (0,125 мг/мл), печёночно-глюкозно-глицериновый агар и бульон (ПГГА, ПГГБ), картофельный агар, эритрит агар или сывороточно-декстрозный агар. [2]

Характеризуются медленным ростом, посевы инкубируют не менее 3 недель, хотя старые лабораторные культуры вырастают уже через 24-48 часов.

Типичные вирулентные штаммы (S-форма) на поверхности агара образуют мелкие, 2- 3мм в диаметре, круглые, выпуклые, с гладкой поверхностью и ровными краями, прозрачные с голубоватым оттенком колонии с возрастом цвет ржавчины; в бульоне - слабое равномерное помутнение, и пристеночное кольцо, в дальнейшем - небольшой осадок.

Авирулентные варианты (R-форма) на агаре образуют шероховатые колонии, в бульоне - неравномерное помутнение с просветлением и крошковатым осадком. На агаре с кровью бруцеллы гемолиза не дают, пигмент не синтезируют. Под действием антибиотиков превращаются в L-формы. Хорошо культивируются в желточном мешке куриного эмбриона.

Биохимическая активность очень низкая: бруцеллы содержат каталазу и оксидазу, нитраты редуцируют в нитриты, цитраты не утилизируют, реакция Фогеса—Проскауэра отрицательная, продуцируют сероводород, разлагают мочевину.

Антигенная структура сложная и близкая у разных видов бруцелл. Имеют соматический О- и капсульный Vi-антигены. До сих пор еще нет ясного представления об антигенной структуре бруцелл. В результате специального изучения установлено наличие двух антигенов — антигена А и антигена М, которые входят в состав микробной клетки каждого вида бруцелл в разных соотношениях. В антигенном составе каждого вида бруцелл имеются как специфические, так и неспецифические общие антигены. Антиген А специфичен для B.abortus и B.suis, антиген М — для B.melitensis. Оба эти антигена являются специфическими. Третий тип — антиген D — является неспецифическим общим антигеном.

 

Факторы патогенности

Бруцеллы являются факультативными внутриклеточными паразитами млекопитающих, включая человека. Обладают высокой инвазивной способностью, образуют фермент агрессии гиалуронидазу. Основными факторами вирулентности являются эндотоксин и капсула. Бруцеллы длительно сохраняются в окружающей среде: в молоке — до 45 дней, в масле, сливках, простокваше и свежих сырах — в течение всего периода их пищевой ценности, в брын-

зе — до 60 дней, в замороженном мясе — свыше 5 мес, в засоленных шкурах — 2 мес, в шерсти — до 3—4 мес, в воде — до 5 мес, в почве — до 3 мес. Малоустойчивы к высокой температуре, при кипячении погибают моментально, при 60°С — в течение 30 мин. Чувствительны к большинству антибиотиков, действию обычно применяемых антисептиков и дезинфектантов в обычных концентрациях.

Резервуаром возбудителя в природе являются сельскохозяйственные и домашние животные — крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, реже олени, лошади, собаки, кошки.

Бруцеллез распространен на всех континентах, особенно в странах с развитым животноводством. Источник инфекции —  больные сельскохозяйственные и домашние животные. Возбудителями бруцеллеза крупного рогатого скота являются В.abortus, мелкого рогатого скота — В.melitensis, свиней — В.suis, оленей — В.neotomae, собак — В.canis, баранов — В.ovis. Больной человек не заразен, является биологическим тупиком. Больные животные выделяют бруцеллы с молоком, мочой, калом, околоплодными водами и др. Человек заражается главным образом алиментарным путем (сырое молоко, молочные продукты, мясо и др.) и контактно при уходе за больными животными и т.п. Восприимчивость человека к бруцеллам высокая. Заболевание носит спорадический характер или возникает в виде отдельных вспышек, что зависит от видовой принадлежности возбудителей. От человека к человеку заболевание не передается.

Лабораторная  диагностика

Диагностика этой болезни основывается на показаниях результатов серологических, бактериологических, а также аллергических методов  исследования (с учётом клинических  признаков болезни – аборты, бурситы, орхиты, эпидидимиты, эндометриты). Общая схема лабораторной диагностики, установленная Федеральным центром гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора в 2012г. приведена в Приложении 1.

Патологический  материал

Для бактериологического  исследования на бруцеллёз (при жизни  животного) в лабораторию направляют: абортированный плод с плодными оболочками, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей, желудок плода, перевязанный с двух концов лигатурой, кусочки  печени и селезёнки плода. Молоко берут от коров в стерильные пробирки по 10 – 15мл из каждой доли вымени (последние  порции), у овец и коз – путём  пункции цистерны вымени посредством  стерильного шприца с иглой. Для  исследования молоко отсылают свежим (в день взятия пробы); если это представляется возможным, то его консервируют(лучше сухой борной кислотой из расчета 0,1г на 10мл молока).При убое самцов (баранов и др.)исследуют пораженные ткани органов – семенники с придатками. [2]

Тканевой  материал от каждого животного в  отдельности упаковывают в целлофан или пергаментную бумагу, затем помещают в водонепроницаемую тару (полиэтиленовый пакет, ящик, банку). Патологический материал отправляют в свежем виде или консервированным 30%-ным стерильным водным раствором химически чистого глицерина в соотношении 1: 4 (1:5). От абортировавших  животных (не ранее чем через неделю после аборта) обязательно исследуют кровь.

В лабораторию  материал доставляют с нарочным и  с сопроводительным письмом.

Бактериологическая диагностика   

Проводится  по общепринятому принципу – микроскопия, высев на питательные среды для  выделения и изучения чистой культуры, биопроба (заражение морских свинок).

Из каждой пробы патматериала готовят два мазка-отпечатка из тканей органов или два мазка из жидкого материала (истечения), высушивают, фиксируют пламенем. Один препарат окрашивают по грамму, другой – специальным методом (по Козловскому или Стампу). Мазки, приготовленные из осадка молока (сливок), после центрифугирования перед окраской следует обезжирить смесью Никифорова.

Для выявления  бруцелл непосредственно в патологическом материале, а также в объектах окружающей среды предложен прямой метод иммунофлюоресценции (РИФ); непрямой метод позволяет обнаружить антитела в сыворотке крови больных, переболевших или вакцинированных животных.

 Для  выделения бруцелл делают посевы на специальные питательные среды (см. Культуральные свойства). При обнаружении роста из типичных колоний готовят мазки, окрашивают специальными методами и просматривают под микроскопом. Затем пересевают на плотную питательную среду и культивируют при тех же условиях.

Кроме того ставят РА на предметном стекле с позитивной бруцеллёзной сывороткой, разведённой 1:50 и 1:2 (для выявления слабоагглютинирующих культур). Первичную культуру B.ovis надлежит подвергнуть серологической идентификации – чистой выделенной культурой гипериммунизируют кроликов, затем их сыворотку исследуют в РДСК с антигеном B.ovis (овисный антиген)

Культуры  бактерии, обладающие типичными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами, дающими положительную РА с позитивной бруцеллёзной сывороткой, относят к бруцеллам. [2]

Для дифференциации видов бруцелл используют чистые культуры (в S-форме). Бруцеллы дифференцируют по способности роста в отсутствии повышенной концентрации СО2, выделению HS2, бактериостатическому действию анилиновых красителей и агглютинации моноспецифическими сывороткам. Кроме того, выпускаются бактериофаги бруцеллезные диагностические жидкие для межвидовой дифференциация штаммов возбудителя бруцеллеза. Набор представляет собой стерильные фильтраты фаголизатов бульонных культур бруцеллезных штаммов, содержащие взвесь частиц соответствующих фагов. Набор включает 4 бактериофага бруцеллезных диагностических: Тбилиси (Тб), Weybridge (Wb), Firenze (Fi), Berkley (Bk2). 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Вид бруцелл	Потребность в СО2	Образование Н2S	Рост в средах с красителями		Агглютинация моноспецифическими сыворотками.			Лизис фагом Тб
			Основной фуксин (1:50000)	Тионин (1:25000)
					А	М	Р
B.melitensis	-	-	+	-	-	+	-	-
B.abortus	+	+	+	-	+	-	-	+
B.suis	-	+	-	+	+	-	-	-
B.ovis	+	-	+	+	-	-	+	-
B.neotomae	-	+	-	-	+	-	-	-
B.canis	-	-	-	+	-	-	+	-

 

Таблица 1. Дифференциальные свойства различных видов бруцелл.

 

Проба с трипафлавином (солянокислая соль 3-6-диамино-10-метилакридина) – реакция Алессандрини и Сабатучц (Alessandrini, Sabatucci) заключается в том, что диссоциированные культуры бруцелл вызывают агглютинацию на стекле в капле 0,2% раствора трипафлавина (в физиологическом растворе); тогда как клетки нормальной недиссоциированной культуры остаются равномерно взвешенными в жидкости.