Классификация и систематика микроорганизмов

Бактерии окрашиваются в красный цвет, неокрашенные капсулы контрастно выделяются на темном фоне препарата.

 

10.Спорообразование у микробов. Биологическая роль. Способ окраски спор

Споры- палочковидные бактерии обладают способностью к спорообразованию, которое заключается в том, что при наступлении условий неблагоприятных для жизни, клетка частично теряет воду, объем и форму, под внешней мембраной образуется плотная сферическая оболочка.

Споруляция бактерий:

1. Подготовительная стадия споруляции сопровождается прекращением деления и увеличением количества липидных включений.
2. Стадия предспоры споруляции обычно начинается бурно. В клетке появляется эллиптическая оболочка, окружающая участок цитоплазмы с изменёнными плотностью и тинкториальными свойствами. Подобное образование обозначают терминами «предспора», или «примордиальная спора».
3. Третья стадия споруляции включает появление оболочки (обычно в течение 10 мин после образования предспоры) и ещё большее увеличение коэффициента светопреломления.
4. Стадия созревания споры сопровождается её уплотнением и снижением метаболической активности клетки.

Время образования споры-18-20часов

Споры могут располагаться центрально, субтерминально или терминально

Окраска спор по методу Циля-Нильсена:

4. Фиксированный мазок покрывают плоской фильтровальной бумагой и наливают на нее карболовый фуксин Циля. Мазок подогревают на горелке до появления паров, затем отводят для охлаждения и добавляют новую порцию красителя. Подогревают повторно 2-3раза
5. Препарат обесцвечивают путем погружения или нанесения на него 5%- раствора сернокислого спирта и промывают несколько раз водой
6. Окрашивают препарат метиленовым синим 3-5мин, промывают водой и высушивают

 

Споры окрашиваются в красный цвет, а палочки в голубой

 

11.Жгутики бактерий, их обнаружение.

Жгутик-это поверхностная структура присутствующая у многих прокариотический клеток и служащая для их движения в жидкой среде или по поверхности твердых сред.

 

По характеру движения подвижные бактерии разделяют на плавающие и скользящие(ползающие). Орган движения плавающих бактерий — жгутики; подвижность скользящих бактерий обеспечивают волнообразные сокращения тела.

По расположению жгутиков подвижные микробы подразделяются на:

• Монотрихи
• Лофотрихи
• Амфитрихи
• Перитрихи

Жгутики состоят их трех субструктур:

• Филамент (фибрилла, пропеллер) — полая белковая нить толщиной 10—20 нм и длиной 3—15 мкм, состоящая из флагеллина, субъединицы которого уложены по спирали. Полость внутри используется при синтезе жгутика — он происходит в направлении от ЦПМ. По полости к собираемому в настоящий момент участку переносятся субъединицы флагеллина.
• Крюк — более толстое, чем филамент (20—45 нм), белковое (не флагеллиновое) образование.
• Базальное тело (трансмембранный мотор)

 

Обнаружение жгутиков окраска по Морозову

Многократное эмпригнирование нитратом серебра.Жгутики утолщаются в виде коричневых нитей. Производится электронное микроскопирование.

Обнаружение подвижности:

1. Препарат раздавленная капля
2. Препарат висячая капля
3. При посеве в столбик полужидкого агара.Подвижность микробы дают дифференцированный рост, а неподвижные рост по ходу укола.

 

Пили, фимбрии или ворсинки — поверхностные структуры, присутствующие у многих бактериальных клеток и представляющие собой прямые белковые цилиндры длиной 1—1,5 мкм и диаметром 7—10 нм. Различаются по строению и назначению, причём у одной бактерии могут присутствовать несколько их типов. они участвуют в прикреплении бактериальной клетки к субстрату.

• Пили I порядка обуславливают прикрепление (адгезию) микроорганизма к опред. Организма хозяина
• Пили II порядка ( конъюгативные , половые) участвуют в переносе генетического материала от донора клетки к реципиентной. Таких пилей от 1-4 на клетку.

12. Отличительные черты строения  Грамм + и Грамм – бактерий. Окраска по Грамму

	Грамм +(фиолетовые)	Грамм- (красные)
толщина	20-60нм	10-20нм
липиды	1-1,6%	2-2,6%
Пептидогликан	40-90%	5-10%
Тейхоева кислота	+	-

 У грамположительных  бактерий муреиновый слой состав- 
ляет 80% от массы клеточной стенки. По Грамму, они окрашива- 
ются в синий цвет. У грамотрицательных бактерий муреиновый 
слой составляет 20% от массы клеточной стенки, по Грамму, они 
окрашиваются в красный цвет. 
У грамположительных бактерий наружный слой клеточной 
стенки содержит липопротеиды, гликопротеиды, тейхоевые кис- 
лоты, у них отсутствует липополисахаридный слой. Клеточная 
стенка выглядит аморфной, она не структурирована. Поэтому при 
разрушении муреинового каркаса бактерии полностью теряют 
клеточную стенку (становятся протопластами), не способны 
к размножению. 
У грамотрицательных бактерий наружный пластический 
слой четко выражен, содержит липопротеиды, липополисахарид- 
ный слой, состоящий из липида А (эндотоксина) и полисахарида 
(О-антигена). При разрушении грамотрицательных бактерий об- 
разуются сферопласты — бактерии с частично сохраненной кле- 
точной стенкой, не способные к размножению.

Окраска по Грамму:

• На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2 мин ее снять, а краситель слить.
• Нанести раствор Люголя на 1-2 мин.
• Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.
• Промыть водой.
• Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 мин, промыть водой, высушить и микроскопировать.

Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет,        грамотрицательные - в красный.

13. Строение и способы изучения  актиномицетов

Актиномицеты (myces - гриб, actis - луч) относят к группе грамположительных неспорообразующих бактерий неправильной формы. Отдельные виды рода Actinomyces (A. israelii, A. naeslundii, A. bovis и др.) являются представителями нормальной микрофлоры организма человека или животных, которые в определенных условиях вызывают актиномикозы.

Морфология и физиология

Тело состоит из несептированного мицелия, который имеет вид ветвящихся нитей. Длина нитей составляет 100-600 мкм. В млодых культурах цитоплазма однородна и содержит отдельные зерна хроматина. при старении наблюдается зернистость и образование вакуолей.характерно простое деление, перешнуровываие и почкование. Грамположительные, неподвижные, неспорообразующие, некислотоустойчивые. Факультативные анаэробы, нуждаются в дополнительном снабжении СО2. Хемоорганотрофы с бродильным типом метаболизма. На плотных средах через 24 ч формируют характерные для отдельных видов микроколонии, а через 7-14 дней - макроколонии. Ферментируют глюкозу с образованием кислоты, обладают слабой протеолитической активностью.

14. Морфология грибов: классификация, строение, методы изучения

Грибы (Fungi, Mycetes) — разнородная группа эукариотических микроорганизмов. Грибы имеют ядро с ядерной оболочкой, цитоплазму с органеллами, цитоплазматическую мембрану (которая содержит фосфолипиды и стеролы) и мощную клеточную стенку, состоящую из глюкана, целлюлозы, хитина, белка, липидов. Грибы состоят из длинных тонких нитей (гиф), сплетающихся в грибницу, или мицелий. Гифы низших грибов — фикомицетов — не имеют перегородок. У высших грибов — эумицетов — гифы разделены перегородками; их мицелий многоклеточный.

Грибы размножаются половым и бесполым способами, а также вегетативным путем (почкование или фрагментация гиф). Бесполое размножение осуществляется у грибов с помощью эндогенных спор, созревающих внутри круглой структуры — спорангия и экзогенных спор — конидий, формирующихся на кончиках плодоносящих гиф

Грибы можно разделить на 7 классов: хитридиомицеты, гифохитридиомицеты, оомицеты, зигомицеты, аскомицеты, базидиомицеты, дейтеромицеты. Среди фикомицетов различают: хитридиомицеты, или водные грибы, ведущие сапрофитический образ жизни или поражающие водоросли; гифохитридиомицеты, имеющие сходство с хитридиомицетами и оомицетами; оомицеты — паразиты высших растений и водяные плесени; зигомицеты включают представителей рода Mucor, распространенных в почве и воздухе и способных  вызывать мукоромикоз легких, головного мозга и других органов. При бесполом размножении на плодоносящей гифе-спорангиеносце образуется спорангий — шаровидное утолщение с оболочкой, содержащее многочисленные споры (спорангиоспоры). Половое размножение (оогамия) у зигомицетов осуществляются путем образования зигоспор, или ооспор.

 

15 Морфология спирохет и методы  их изучения

Спирохеты(лат spirochaeta - бактерия в виде изогнутого длинного винта).Они имеют штопорообразную извитую форму. Размеры их колеблются в больших пределах(ширина-0,3-1,5 мкм и длина 7-500 мкм) Тело спирохет состоит из осевой нити и цитоплазмы, спирально завитой вокруг нити. Спирохеты имеют трехслойную наружную мембрану. Спор, капсул и жгутиков не образуют. Спирохеты обладают активной подвижностью вследствие выраженной гибкости тела. По Романовскому-Гимзе одни виды окрашиваются в синий, другие – в сине-фиолетовый, третьи – в розовый цвет. Хорошим методом обработки спирохет является серебрение. Тинкториальные свойства используют для дифференциации сапрофитов и патогенных спирохет. (далее можно не писать,но на всякий случай написала) В порядок  Spirocheatales, семейство Spirochaetaceae входят сапрофиты и патогенные виды. К сапрофитам относятся  spirochaeta и cristispira, представляющие собой крупные клетки размером 200-500 мкм,некоторые имеют крипты(волнистые гребни),концы их заостренены или тупые,они обитают на мертвых субстратах в загрузненных водоемах,в кишечнике(по Романовскому-гимзе окрашиваются в синий)

16 Морфология риккетсий, способы изучения.

Риккетсии(Rickettsia) включены в порядок Rickettsiales; представляют собой полиморфные микроорганизмы, живут и размножаются только в клетках(цитоплазме и ядре) тканей животных, человека и переносчиков. Кокковидные формы имеют вид очень мелких, гомогенных или однозернистых овоидов диаметром около 0,5 мкм; довольно часто образуют диплоформы. Палочковидные формы риккетсий – короткие образования диаметром 1-1,5 мкм с зернами на концах или длинные и обычно изогнутые тонкие палочки длиной 3-4 мкм. Нитевидные(мицеллярные) формы имеют размер 10-40 мкм и более; иногда это изогнутые и многозернистые нити. Риккетсии не образуют спор и капсул; они подвижны, хорошо окрашиваются по Романовскому-Гимзе, Цилю-Нильсену, грамотрицательны. у риккетсий имеются внутренняя(6нм) и наружной оболочки, выполняющей функции стенки и состоящей из трех слоев. В цитоплазме риккетсий обнаружены гранулы типа рибосом величиной 20-70 нм и вакуолеобразные структуры 6-8 нм в диаметре. Риккетсии размножаются путем деления кокковидных и палочковидных форм с образованием гомогенных популяций соответствующего типа, а также в результате дробления нитевидных форм с последующим развитием кокковидных и палочковидных образований. Большая часть риккетсий относится к безвредным микроорганизмам. Около 50 различных видов риккетсий найдено в кишечнике и слюнных железах тлей, клопов, клещей. Патогенные риккетсии из семейства Rickettsiaceae поражают различные виды животных и человека; заболевания, вызываемые риккетсиями, носят название риккетсиозов.

17 Общая характеристика простейших, способы их изучения.

Простейшие –одноклеточные организмы, тело которых состоит из цитоплазмы и одного или нескольких ядер. Клетка простейшего – это самостоятельная особь, проявляющая все основные свойства живой материи. Она выполняет функции всего организма, тогда как клетки многоклеточных составляют лишь часть организма, каждая клетка зависит от многих других.

Большинство представителей класса имеет микроскопические размеры – 3—150 мкм. Только наиболее крупные представители вида (раковинные корненожки) достигают 2–3 см в диаметре. Среда их обитания – вода, почва, организм хозяина (для паразитических форм). Строение тела простейшего типично для эукариотической клетки. Имеются органеллы общего (митохондрии, рибосомы, клеточный центр, ЭПС и др.) и специального назначения. К последним относятся органы движения: ложноножки, или псевдоподии (временные выросты цитоплазмы), жгутики, реснички, пищеварительные и сократительные вакуоли. Органоиды пищеварения – пищеварительные вакуоли с пищеварительными ферментами. Питание происходит путем пино– или фагоцитоза. Непереваренные остатки выбрасываются наружу. Некоторые простейшие имеют хлоропласты и питаются за счет фотосинтеза. Пресноводные простейшие имеют органы осморегуляции – сократительные вакуоли, которые периодически выделяют во внешнюю среду излишки жидкости и продукты диссимиляции. Большинство простейших имеет одно ядро, но есть представители с несколькими ядрами. Ядра некоторых простейших характеризуются полиплоидностью. Цитоплазма неоднородна. Она подразделяется на более светлый и гомогенный наружный слой, или эктоплазму, и зернистый внутренний слой, или эндоплазму. Наружные покровы представлены либо цитоплазматической мембраной (у амебы), либо пелликулой (у эвглены). Систематика простейших основана на способах движения, размножения и циклах развития. Тип Protozoa подразделяется на 4 класса: жгутиковые, саркодовые, споровики, ресничные(инфузории). Простейшие размножаются простым и множественным делением, половым путем, а также сложным способом -  половым и бесполым( плазмодии малярии). Амебы, лямблии и балантидии могут образовывать цисты как более устойчивые формы существования особей. К патогенным простейшим относятся возбудители лейшманиоза, трипаносомоза, трихомониаза, лямблиоза, амебиаза, малярии, токсоплазмоза, балантидиаза. Во внешней среде патогенные простейшие быстро отмирают. Цисты энтамеб, лямблий и балантидий длительно сохраняются, не теряя своих биологических свойств. Простейшие окрашиваются по Романовскому-Гимзе(ядро-красного, цитоплазма- синего цвета). За последние годы широкое применение в изучении простейших нашли методы электронной микроскопии, цитохимии, ультрафиолетовой микроскопии.