Микробиологические методы диагностики микозов

Каменск-Уральский филиал ГБОУ СПО СО «СОМК»

 

 

 

 

 

Реферат

на тему: «Методы микробиологической диагностики микозов»

 

 

 

 

 

Автор работы: студентка

101 группы ФО

Клементьева Л. И.

Преподаватель: Бичина Н. Ю.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2013

Содержание

 

Введение…………………………………………………………………………3

1. Микозы………………………………………………………………………..4

2. Организация работы микробиологической лаборатории………………….5

3. Взятие и доставка патологического материала…………………………… 6

4. Методы микробиологической диагностики грибковых инфекций………..7

   4.1. Микроскопия…………………………………………………………..….7

          4.1.1. Неокрашенные препараты……………………………………..…7

          4.1.2. Окрашенные препараты……………………………………….….7

    4.2. Культуральное исследование………………………………………..….7

   4.3 Люминесцентное обследование……………………………………..…..9

   4.4. Иммунологическое исследование……………………………………..10

Заключение…………………………………………………………………..…11

Список литературы………………………………………….…………………12

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Введение

 

Микозы – широко распространенная и трудноизлечимая группа инфекций, вызванных большим числом видов различных патогенных и условно-патогенных грибов.

Клиническая картина грибковых  заболеваний кожи весьма полиморфна, поэтому во всех случаях диагноз должен быть подтвержден лабораторными методами исследования. Для лабораторной диагностики микозов используют микроскопический, люминесцентный, культуральный, иммунологический (аллергологический и серологический) методы исследования, а также эксперименты на животных.

В своём реферате я хочу подробно рассказать об этих лабораторных методах диагностики микозов.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1. Микозы

 

Микозы – широкораспространённая группа инфекционных заболеваний, вызванных большим числом видов ( более 200) патогенных и условно- патогенных грибов. Микоз развивается медленно, рецидивирует чаще, чем бактериальная инфекция, и не оставляет после себя длительного иммунитета. Иногда грибковые инфекции сопровождаются лишь небольшим воспалением, но часто вызывают образование хронических абсцессов, язв или опухолеподобных гранулем, состоящих из соединительной ткани. Микозы могут иметь прогрессирующее течение и даже стать причиной смерти.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2. Организация работы микробиологической лаборатории

 

Устройство и режим  работы микологической лаборатории  должны обеспечивать предупреждение рассеивания  патологического материала в  окружающей среде, чтобы избежать заражения, аллергизации и распространения  инфекции среди сотрудников и больных.

Лаборатория должна иметь  определенный набор помещений, включая комнату (или специально оборудованное место) для приема и регистрации анализов, бокс-посевную для посева и работы с культурами, комнату с автоклавами для стерилизации и уничтожения патологического материала и культур, моечную, препараторскую, кладовую, гардероб для одежды, туалет. Пол и стены помещений, где проводится лабораторная диагностика микозов, должны выдерживать мытье дезинфицирующими растворами. Лаборатория укомплектовывается легко подвергающейся дезинфекции мебелью, включая шкафы для чистой лабораторной посуды, реактивов, питательных сред; соответствующим оборудованием и инструментами.

Для работы с патологическим материалом и культурами грибов лабораторные столы следует покрывать стеклами с частично окрашенной в черный цвет обратной стороной: на черном фоне лучше  видны обычно светлые культуры грибов, а также мелкие частицы исследуемого материала. Часть стекла окрашивается в белый цвет, так как на белом  фоне хорошо видны оттенки пигмента у исследуемых колоний. Иногда для  этих целей под стекла подкладывают листы черной и белой бумаги.

Воздух в лаборатории  стерилизуют дезинфицирующими аэрозолями или ультрафиолетовыми лучами.

Все посевы производят вблизи огня спиртовки или газовой горелки с обжиганием инструмента и краев пробирки. Засеянные пробирки и другие емкости должны иметь четкие надписи с указанием даты посева, номера анализа, вида и штамма возбудителя.

 

3. Взятие доставка патологического материала

 

Успех лабораторного исследования микозов во многом зависит от правильного  взятия патологического материала. Поскольку грибы способны поражать различные органы человека, при подозрении на микоз необходимо исследовать различный патологический материл. В дерматологической практике чаще всего приходится иметь дело с микозами, при которых исследованию на грибы подлежат кожные чешуйки, волосы, ногти. При подозрении на глубокие и системные микозы может возникнуть необходимость лабораторной диагностики на грибы мокроты, промывных вод, мочи, фекалий, гноя, отделяемого слизистых оболочек, крови, кусочков органов и биопсированной ткани.

Необходимо помнить, что  любой изучаемый в лаборатории  материал потенциально опасен. Взятие патологического материала следует  производить в асептических условиях, в халатах и марлевых масках. Одежду больного при взятии материала защищают клеенчатой пелериной и салфеткой. Взятие материала с ног производят на специальной скамейке, покрытой клеенкой. Пелерины, салфетки после  каждого использования обеззараживают кипячением в течение 15 мин или  погружением в дезраствор (5% раствор  хлорамина на 3 ч или 5% осветленную  хлорную известь –на 2 ч). Патологический материал или культуры переносят в специальной таре (металлические или пластмассовые ящики с крышками, биксы), которую внутри и снаружи ежедневно обрабатывают дезрастворами.

 

 

 

 

 

 

 

4. Методы микробиологической диагностики грибковых инфекций

 

4.1. Микроскопия

Микроскопия — один из основных методов выявления возбудителей микозов. Позволяет проводить экспресс-диагностику  микозов и получать результат  в течение 1-2 ч, тогда как для  выделения культуры возбудителя  необходимы недели. Для экспресс – диагностики препараты часто необходимо окрашивать специальными красителями, так как простая окраска гематоксилином и эозином часто не позволяет выявить клетки грибов.

 

4.1.1.  Неокрашенные препараты

Микроскопия методом висячей  или раздавленной капли. Метод позволяет  выявить структуры грибов в клинических  образцах без предварительного окрашивания.

Обработка 10% едким кали (КОН). Метод используют в первую очередь  для визуализации структур возбудителей в фрагментах кожи и её придатках (ногти, волосы), отделяемом очагов поражения и влагалища. В указанных образцах содержится большое количество клеток, в которых КОН разрушает кератин, оставляя неизменёнными клетки грибов.

 

4.1.2.  Окрашенные препараты

•  Окраска по Граму. В мазках из клинического материала грибы представлены грамположительными клетками. Клетки Cryplococcus neoformans плохо воспринимают красители, что можно использовать как дифференциально-диагностический признак при микроскопии окрашенных мазков СМЖ.

•  Окраска нигрозином или тушью по Бурри мазков СМЖ позволяет выявить капсулированные клетки Cryptococcus neoformans. Для идентификации этого микроорганизма можно использовать муцикармин или конго красный.

•  Окраска по Романовскому – Гимзе или Райту мазков крови и костного мозга позволяет выявить дрожжевую форму Histoplasma capsulatum в цитоплазме фагоцитов.

•  Окраска метенаминовым серебряным по Гомори. Метод включает предварительную обработку гистологических препаратов хромовой кислотой с последующим нанесением красителя (клетки грибов тёмно-серые или чёрные).

•  Окраска по Гридли. Метод включает предварительную обработку препаратов хроматом лейкофуксина с последующим нанесением фуксинового альдегида и метанилового жёлтого (клетки грибов розово-пурпурные на жёлтом фоне).

•  Окрашивание перйодной кислотой и реактивом Шиффа (по Мак-Манусу). 1,2-Гликольные группировки полисахаридов клеточных стенок грибов сначала окисляются перйодной кислотой до альдегидов, реагирующих с сульфитом лейкофуксина реактива Шиффа; клетки окрашиваются в насыщенно розовый или красный цвет.

4.2. Культуральное исследование

Культуральное исследование является высокочувствительным и специфическим методом лабораторной диагностики микозов. Его необходимо производить независимо от результатов микроскопии, так как культуральный метод позволяет иногда выявлять возбудителя при отрицательных данных микроскопии; он дает возможность определять род и вид возбудителя и, следовательно, проводить адекватную терапию и профилактику заболевания. Особенно полезен культуральный метод для диагностики латентных форм микозов, носительства дерматофитов здоровыми людьми.

Используют плотные и жидкие питательные среды (Сабуро, сусло-агар, Чапека и др.). Инкубация в термостате (22 – 28 .С) длительная (3 – 4 недели). Чистую культуру гриба идентифицируют по совокупности признаков: форме колоний, их цвету, консистенции, микроскопической картине (характер мицелия, расположение спор, конидиеносцев) и другим признакам.

 

4.3. Люминесцентное обследование

В 1925 г. Было обнаружено, что волосы, пораженные некоторыми дерматофитами, дают характерное свечение в ультрафиолетовых лучах, пропущенных через фильтр Byда. Стекло Byда состоит из сульфата бария, содержит около 9% окиси никеля; оно пропускает лучи длиной 365 нм. В качестве источника ультрафиолетовых лучей можно использовать различные приборы. Природа свечения точно не установлена. Волос продолжает светиться после гибели гриба и после попыток экстрагировать флюоресцирующий материал горячей водой или холодным раствором бромида натрия. Интенсивность и характер свечения зависят от рН раствора. Полагают, что флюоресцирующая субстанция появляется в процессе взаимодействия гриба и растущего волоса.

Люминесцентный метод можно  использовать как для диагностики  и контроля над эффективностью лечения  у отдельных больных, так и в эпидемиологических очагах. Компактные передвижные установки удобны для обследования контактных людей в школах, детских садах и т. п.

 

4.4. Иммунологическое исследование

Используют для выявления специфической  перестройки организма и серологической диагностики грибковых заболеваний. Для обнаружения специфических антител в сыворотке пробы проводят следующие серологические реакции: агглютинации, преципитации, связывания комплемента, иммунофлюоресценции с соответствующими антигенами.

Аллергическое состояние организма  больного выявляют с помощью аллергических  кожных проб. Аллергены наносят на скарифицированную кожу по Пирке  или втиранием в кожу по Моро, внутрикожно по Манту, а также уколом в кожу. С помощью этих проб выявляют аллергические реакции как немедленного, так и замедленного типа, что позволяет оценить состояние гуморального и клеточного иммунитета.

Сопоставление результатов серологических и аллергических реакций оказывается полезным как для диагностики, так и для прогноза течения микозов.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Заключение 

 

Проблема микозов на сегодняшний  день стоит достаточно остро. Во-первых, грибковые поражения обезображивают кожу больного, во-вторых, при заболевании  происходит аллергизация организма, в-третьих, поражаются многие органы и ткани (системные  микозы), происходит образование гранулем, нарушающих функции многих органов.

Современная медицина разработала средства, которые замедляют размножение грибков, но пока нет таких, которые бы полностью уничтожали их. Поэтому любая тема, касающаяся грибковых инфекций на сегодняшний день, будет важна.

В процессе работы с рефератом  я изучила методы микробиологической диагностики микозов и убедилась, что данная тема актуальна на сегодняшний день, ведь от правильной постановки диагноза зависит точное лечение.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Список литературы

1. Здоровье и медицина. «Общая характеристика грибов, грибковые заболевания кожи, вызываемые дерматофитами - Терапия и профилактика при онихомикозах» 2013 г.

 

2. ООО "Медицинский центр «Авиценна». «Диагностика микозов с чувствительностью к патогенным грибковым препаратам (Candida, Trichosporon spp., Cryptococcus neoformans)» 2011 г.

 

3. Copyright 2007-2012 Микробиология - в помощь микробиологу All Rights Reserved.